PhD Thesis_ver3.pdf

More documents

Recommendations

Info

Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на мултипления миелом 4. Четиридесет и осем часа след началото, средата в биореактора се опреснява като се изтеглят 5 ml от нея и се заместват със същия обем прясна хранителна среда. 5. На 72-ия час от началото напълно се изтегля наличната в биореактора среда, като се внимава да не се изтеглят и сфероидите от клетки. Биореакторът се запълва с 10-11 ml прясна хранителна среда или суспензия от миеломни клетки в хранителна среда (0,03.10 6 кл./ml). 6. На 120-ия час от началото култивирането приключва. Сфероидите от клетки се изваждат от биореактора и се подлагат на имунохистохимичен анализ (т. 2.8.). 2.2. Изолиране на мононуклеарни клетки чрез градиентно центрофугиране Беше използван методът на центрофугиране в плътностен градиент, при което клет- ките се разделят на фракции в зависимост от теглото и формата си. Изолирането на мононуклеарни клетки от костно-мозъчен аспират от пациенти с ММ беше извършвано съгласно следния протокол: 1. В две стерилни 15-милилитрови центрофужни епруветки се отпипетират по 5 ml Ficoll-PaqueTM PLUS. 2. Три милилитра костно-мозъчен аспират се смесват със 6 ml фосфатен буфер. По 4,5 ml от получената смес се наслояват много бавно върху петте милилитра Ficoll-Pa- que. За целта е най-удобно да се използва спринцовка с подходяща игла. 3. Епруветките се центрофугират 30 минути при 400 × g (1 750 об./мин с ротор 220.97 на Hermle). 4. Получените бели пръстени от мононуклеарни клетки (фиг. III.3.) се засмукват внимателно с пипета и се прехвърлят в нова епруветка. Разреждат се с фосфатен буфер в съотношение 1:3. 11). 5. Изолираните мононуклеарни клетки се преброяват с камера на Neubauer. 6. Клетките се центрофугират 10 минути при 150 × g (1 500 об./мин с ротор F-45-12- 7. Надстоящата течност се изтегля, а клетките се ресуспендират в нужното количест- во хранителна среда. За изолиране на мононуклеарни клетки от кръв от умбиликална вена беше използван същият протокол с модификация в стъпка 2. – бяха смесвани 4,5 ml кръв с 4,5 ml фосфатен буфер. Така бяха изолирани клетки от предоставена кръв от три раждания. 100
101 III. Материали и методи – Методи След това трите проби от изолирани мононуклеарни клетки бяха замразени според процедурата, описана в т. 2.1.4., по около 20.10 6 клетки на епруветка. костно-мозъчен аспират Ficoll-Paque PLUS 400×g, 30 мин при 18-20 °C Фиг. III.3. Фракциониране на костно-мозъчен аспират чрез градиентно центрофугиране. 2.3. МТТ-метод за оценяване на виталността и пролифератив- ната активност на клетъчните култури През 1983 г. Mosmann описва колориметричен метод, основан на редукцията на тет- разолиевата сол MTT под действие на митохондриалните дехидрогенази в живите клет- ки (Mosmann 1983). Дехидрогеназите трансформират МТТ до водонеразтворими виоле- тови формазанови кристали (фиг. III.4.) в количества, правопропорционални на броя на жизнеспособните клетки. Абсорбцията на пробите при 550 nm е мярка за концентраци- ята на формазана и съответно за броя на жизнеспособните клетки. Абсорбцията на про- бите може да се представи като процент от тази на контролата. тромбоцити лимфоцити и др. мононуклеарни клетки Ficoll-Paque PLUS гранулоцити и еритроцити Фиг. III.4. Редукция на тетразолиевата сол МТТ до формазан
Page 1:
МЕДИЦИНСКИ УНИВЕРС
Page 4 and 5:
Сравнително in vitro и
Page 6 and 7:
Page 8 and 9:
Page 10 and 11:
Page 13 and 14:
Увод Мултипленият
Page 15 and 16:
15 I. Литературен обз
Page 17 and 18:
Page 19 and 20:
VEGF и bFGF TNFα IL-6 СКМК TN
Page 21 and 22:
Page 23 and 24:
Page 25 and 26:
Page 27 and 28:
Page 29 and 30:
Page 31 and 32:
Page 33 and 34:
Page 35 and 36:
Page 37 and 38:
Page 39 and 40:
Page 41 and 42:
Page 43 and 44:
1.6.7. Инхибитори на Hs
Page 45 and 46:
Page 47 and 48:
1.7. Заключение 47 I. Л
Page 49 and 50: 49 I. Литературен обз
Page 59 and 60: 2.5.7. Непреки механи
Page 65 and 66: 3. Куркумин 3.1. Добив
Page 67 and 68: 3.3.1. Пряко взаимоде
Page 85 and 86: II. ЦЕЛ И ЗАДАЧИ 1. Це
Page 87 and 88: III. МАТЕРИАЛИ И МЕТО
Page 89 and 90: 89 III. Материали и ме
Page 97 and 98: среда, предварител
Page 99: 99 III. Материали и ме
Page 107 and 108: хранителна среда. 10
Page 113 and 114: до 6. 113 III. Материали
Page 115 and 116: броя на пробите. 4. Т
Page 129 and 130: ресуспендирани ядр
Page 145 and 146: 2.16.2. Пречистване на
Page 147 and 148: 2.17.1. Трансфекция с
Page 151 and 152:
151 III. Материали и ме
Page 153 and 154:
IV. РЕЗУЛТАТИ 1. Клет
Page 155 and 156:
IV. Резултати - Клетъ
Page 157 and 158:
Page 159 and 160:
Page 161 and 162:
Page 163 and 164:
Page 165 and 166:
Page 167 and 168:
Page 169 and 170:
Page 171 and 172:
Page 173 and 174:
Page 175 and 176:
Page 177 and 178:
Page 179 and 180:
Page 181 and 182:
Page 183 and 184:
Page 185 and 186:
Page 187 and 188:
Page 189 and 190:
Page 191 and 192:
Page 193 and 194:
Page 195 and 196:
Page 197 and 198:
IV. Резултати - Механ
Page 199 and 200:
Page 201 and 202:
Page 203 and 204:
А IV. Резултати - Мех
Page 205 and 206:
Page 207 and 208:
Erufosine, µM: А Erufosine, µM:
Page 209 and 210:
А Б IV. Резултати - Ме
Page 211 and 212:
Page 213 and 214:
Page 215 and 216:
Page 217 and 218:
Page 219 and 220:
Page 221 and 222:
OPM-2 Относително нив
Page 223 and 224:
RPMI-8226 Относително н
Page 225 and 226:
Page 227 and 228:
Page 229 and 230:
60 50 40 30 20 10 IV. Резулт
Page 231 and 232:
3. Влияние на различ
Page 233 and 234:
IV. Резултати - Влиян
Page 235 and 236:
Page 237 and 238:
Page 239 and 240:
Page 241 and 242:
Page 243 and 244:
Page 245 and 246:
Page 247 and 248:
Фиг. IV.73. Влияние на
Page 249 and 250:
Фиг. IV.74. Влияние на
Page 251 and 252:
Page 253 and 254:
Page 255 and 256:
Page 257 and 258:
тромбин: IV. Резулта
Page 259 and 260:
Page 261 and 262:
Б IV. Резултати - Вли
Page 263 and 264:
Page 265 and 266:
Page 267 and 268:
Page 269 and 270:
Мигрирали клетки, %
Page 271 and 272:
Page 273 and 274:
Page 275 and 276:
% на преживелите кл
Page 277 and 278:
Page 279 and 280:
U-266 - + - + - - 20 20 IV. Рез
Page 281 and 282:
Page 283 and 284:
Гъстота на клеткит
Page 285 and 286:
V. ОБСЪЖДАНЕ НА РЕЗУ
Page 287 and 288:
287 V. Обсъждане на ре
Page 289 and 290:
Page 291 and 292:
Page 293 and 294:
Page 295 and 296:
Page 297 and 298:
Page 299 and 300:
Page 301 and 302:
Page 303 and 304:
Page 305 and 306:
Page 307 and 308:
Page 309 and 310:
309 VI. Изводи 6. Еруфо
Page 311 and 312:
VII. БИБЛИОГРАФИЯ 1. Ab
Page 313 and 314:
313 VII. Библиография 3
Page 315 and 316:
Page 317 and 318:
Page 319 and 320:
Page 321 and 322:
Page 323 and 324:
Page 325 and 326:
Page 327 and 328:
076) Стерилни епруве
Page 329 and 330:
2.3. За оценка на адх
Page 331 and 332:
331 VIII. Приложение I
Page 333 and 334:
1 M MOPS; 1 M Трис; 2% SDS; 20
Page 335 and 336:
335 VIII. Приложение I Ak
Page 337 and 338:
337 VIII. Приложение I Go
Page 339 and 340:
339 VIII. Приложение I 6.
Page 341 and 342:
pH на буфера трябва
Page 343 and 344:
- 5`-праймер: 5` - ЦГЦ А
Page 345 and 346:
345 VIII. Приложение I T
Page 347 and 348:
10× TBE-буфер, приготв
show all

PhD Thesis_ver3.pdf

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?