PhD Thesis_ver3.pdf

Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на
мултипления миелом
4.7. За имунологичната обработка на мембраните:
Клатачна машина
10× буфер (TBS), който беше приготвян по следната рецепта:
Трис 24,2 g
NaCl 80 g
Двойно дестилирана вода до 500 ml
37%-ен разтвор на HCl до pH 7,6
Двойно дестилирана вода до 1000 ml
Преди употреба се разрежда с дестилирана вода в съотношение 1:9.
Блокиращ разтвор със състав:
Обезмаслено мляко на прах 25 g
Tween 20 0,5 ml
1× TBS, pH 7,6 500 ml
Маркиращ разтвор със състав:
Обезмаслено мляко на прах 2,5 g
Tween 20 0,5 ml
1× TBS, pH 7,6 500 ml
Първични антитела
Actin (C-11) – козе IgG поликлонално антитяло срещу човешки β-актин, 200
µg/ml (Santa Cruz Biotechnology, САЩ; кат. № sc-1615; парт. № I2608)
Bcl-2 (100) – мише IgG1 моноклонално антитяло срещу човешки Bcl-2, 200
µg/ml (Santa Cruz Biotechnology; кат. № sc-509; парт. № L2807)
Bcl-XL (H-5) – мише IgG1 моноклонално антитяло срещу човешки Bcl-XL,
200 µg/ml (Santa Cruz Biotechnology; кат. № sc-8392; парт. № I0407)
Mcl-1 (22) – мише IgG1 моноклонално антитяло срещу човешки Mcl-1L/S; 200
µg/ml (Santa Cruz Biotechnology; кат. № sc-12756)
Rb (IF8) – мише IgG1 моноклонално антитяло срещу човешки Rb, 200 µg/ml
(Santa Cruz Biotechnology; кат. № sc-102; парт. № G1305)
p53 (DO-1) – мише IgG2a моноклонално антитяло срещу p53, 200 µg/ml (Santa
Cruz Biotechnology; кат. № sc-126 ; парт. № D2908)
NF-κB p65 (C-20) – заешко IgG поликлонално антитяло срещу човешки NF-
κB p65, 200 µg/ml (Santa Cruz Biotechnology; кат. № sc-372; парт. № K1505)
334