PhD Thesis_ver3.pdf
PhD Thesis_ver3.pdf
PhD Thesis_ver3.pdf
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на<br />
мултипления миелом<br />
А<br />
1,0 1,0 0,9 0,6 - -<br />
Б<br />
1,0 1,0 0,9 0,3<br />
Фиг. IV.101. Сравнение на степента на експресия на Bcl-XL (на РНК- и на протеиново<br />
ниво) в клетки U-266 и в техни разновидности, получени след стабилна трансдукция<br />
с лентивирусни частици. Използвани са вирусни частици, носещи ген за<br />
интерферираща РНК насочена срещу иРНК за Bcl-XL (shBcl-XL), както и контролни<br />
вирусни частици, носещи ген за зелено-флуоресциращия протеин copGFP или<br />
ген за контролна РНК-секвенция (shControl), която не предизвиква специфично<br />
разграждане на никоя известна иРНК. Трансдуцираните клетки са култивирани в<br />
продължение на 2 месеца в селектираща среда, съдържаща антибиотика пуромицин.<br />
След лизиране, от клетките са извлечени РНК и протеини и е проведена RT-<br />
PCR (А) или съответно имуноблот (Б). Еднаквото количество изходна кДНК в отделните<br />
реакции е проконтролирано чрез паралелнa PCR със специфични праймери<br />
за доказване на кДНК за синтез на ензима глицералдехид-3-фосфат-дехидрогеназа<br />
(GAPDH). Евентуални отклонения са взети предвид при изчисляването на<br />
относителните нива на иРНК за Bcl-XL в отделните проби. Контрол върху равномерността<br />
на нанасяне на пробите при имуноблота е проведен чрез сравняване на<br />
нивата на убиквитерния протеин β-актин в отделните проби. Евентуални отклонения<br />
са взети предвид при изчисляването на относителните нива на Bcl-XL.<br />
На фиг. IV.102. са представени получените растежни криви за клетки U-266 и за тех-<br />
ните стабилно трансдуцирани производни. Всички стабилно трансдуцирани производ-<br />
ни се характеризират с по-бавна пролиферация в сравнение с изходните нетрансдуци-<br />
рани клетки. Най-бавно размножаващите се клетки са U-266/shControl.<br />
282<br />
Bcl-X L<br />
β-actin<br />
относително ниво<br />
на Bcl-XL<br />
Bcl-X L<br />
GAPDH<br />
относително ниво<br />
на иРНК за Bcl-XL
Change language