PhD Thesis_ver3.pdf

Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на
мултипления миелом
Erufosine, µM:
6 h
0 5 10 20 40
Фиг. IV.53. Въздействие на Erufosine върху степента на фосфорилиране (съотв.
степента на функционална активност) на ключови сигнални протеини в миеломни
клетки RPMI-8226. Клетките са третирани с еруфозин в концентрации до 40
µМ за период от 6 или 14 часа, след което са лизирани и са анализирани чрез имуноблот.
Контрол върху равномерността на нанасяне на пробите е проведен чрез
сравняване на нивата на убиквитерния протеин β-актин в отделните проби. Изследвани
са и общите нива на някои от сигналните протеини (Akt, JNK и ERK) с
цел да се провери дали се запазват постоянни в отделните проби.
чаи еруфозинът повишава степента на фосфорилиране на ERK. Сред 6-часовите проби,
този ефект е най-силно изявен в третираните с 20 или 40 µM еруфозин (4,5-кратно по-
вишение), а сред 14-часовите проби – в третиранaтa с 5 µM еруфозин (5,7-кратно пови-
шение). В клетките, третирани с 40 µM еруфозин за 14 часа се наблюдава спад в нивото
на p-ERK (Thr202/Tyr204). По подобен начин се променя и нивото на p-p90RSK
(Ser380). Сред 6-часовите проби, покачването на нивото на p-p90RSK е най-голямо в
третиранaтa с 40 µM еруфозин (15 пъти), а сред 14-часовите проби – в третиранaтa с 10
µM еруфозин (2,1 пъти). Високите концентрации Erufosine предизвикват спад в нивото
на p-MSK1 (Thr581). В никоя от 6-часовите проби не се открива p-STAT3 (Tyr705), но в
14-часовите проби може да се установи наличие на този активиран транскрипционен
фактор, като нивото му е най-високо в клетките, третирани с 10 µM Erufosine.
14 h
0 5 10 20 40
218
p-Akt1/2/3 (Ser473) (56/60 kDa)
Akt1/2/3 (56/60 kDa)
p-JNK1/2/3 (Thr183/Tyr185) (46/54 kDa)
JNK1/2/3 (46/54 kDa)
p-c-Raf (Ser338) (74 kDa)
p-MEK1/2 (Ser217/221) (45 kDa)
p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (42/44 kDa)
ERK1/2 (42/44 kDa)
p-p90RSK (Ser380) (90 kDa)
p-MSK1 (Thr581) (90 kDa)
p-STAT3α/β (Tyr705) (79/86 kDa)
β-актин (42 kDa)