PhD Thesis_ver3.pdf

Erufosine, µM:
А
Erufosine, µM:
Б
IV. Резултати – Механизъм на действие на изследваните вещества
24 h 48 h 72 h
0 5 10 15 5 10 15 5 10 15
24 h 48 h 72 h
0 2 5 15 2 5 15 2 5 15
Фиг. IV.47. Еруфозинът индуцира фрагментация на Bcl-2 при клетки OPM-2 (A),
но не оказва видимо въздействие върху Bcl-2 и Bcl-XL при клетки RPMI-8226 (Б).
Клетките са третирани с еруфозин в концентрации до 15 µМ за период от 24 до 72
часа, след което са лизирани и са анализирани чрез имуноблот. Контрол върху
равномерността на нанасяне на пробите е проведен чрез сравняване на нивата на
убиквитерния протеин β-актин в отделните проби.
Активирането на апоптотичните каскади беше изследвано и в клетки, третирани с
еруфозин за по кратки периоди от време (6 или 14 часа), но с по-високи концентрации,
достигащи до 40 µМ. В този случай бяха използвани антитела, свързващи се само с ак-
тивните фрагменти на каспази-9 и -3. Получените резултати са представени на фиг.
IV.48. При клетъчна линия U-266 не се наблюдават признаци за индуциране на апопто-
за, с изключение на едва забележимо фрагментиране на PARP в клетките, третирани с
40 µМ еруфозин за 14 часа. При клетъчна линия OPM-2 се наблюдава концентрацион-
но-зависимо активиране на каспази-9 и -3, съпроводено с фрагментиране на PARP. В
клетките, изложени на действието на Erufosine за 6 часа, тези промени настъпват при
минимална концентрация 10 µМ. В клетките, третирани за 14 часа, промените настъп-
ват при минимална концентрация 5 µМ. При клетъчна линия RPMI-8226 каспаза-9 се
активира след въздействие с минимум 40 µМ Erufosine за 6 часа или минимум 20 µМ
Erufosine за 14 часа. Активиране на каспаза-3 и фрагментиране на PARP се установява
само в клетките, третирани с 40 µМ Erufosine за 14 часа.
При друг експеримент, проведен върху клетки OPM-2 и RPMI-8226, беше сравнена
степента на активиране на апоптотичните каскади от различни вещества с противомие-
ломно действие. Клетки OPM-2 бяха третирани в продължение на 12 или 24 часа с еру-
фозин (5 или 15 µМ), мелфалан (50 µМ) или куркумин (10 или 20 µМ). Получените ре-
207
Bcl-2
фрагмент от Bcl-2
β-актин
Bcl-2
Bcl-XL
β-актин