PhD Thesis_ver3.pdf

Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на
мултипления миелом
100 mM NaCl;
10 mM Трис.HCl;
1 mM EDTA;
двойно дестилирана вода.
Непосредствено преди употреба се прибавят протеиназни инхибитори:
Смес от протеиназни инхибитори Complete (Roche Applied Science; кат. №
1697498) – 25× разтвор, съхраняван при –20 C. Разтворът беше приготвян съгласно
инструкциите на производителя, чрез разтваряне на една таблетка Complete в 2 ml
дестилирана вода.
NaVO3 (натриев метаванадат) – 100× разтвор (0,1 М), съхраняван при
−80 C. Крайна концентрация в суспензионния буфер: 1 mM.
Лизиращ буфер със състав:
100 mM Трис.HCl;
4% SDS (натриев додецилсулфат);
20% глицерол;
двойно дестилирана вода.
Непосредствено преди употреба се прибавят протеиназни инхибитори:
DTT – 5× разтвор (1 М), съхраняван при –20 C. Крайна концентрация в
лизиращия буфер: 200 mM.
Смес от протеиназни инхибитори Complete (Roche Applied Science; кат. №
1697498) – 25× разтвор, съхраняван при –20 C. Разтворът беше приготвян съгласно
инструкциите на производителя, чрез разтваряне на една таблетка Complete в 2 ml
дестилирана вода.
NaVO3 (натриев метаванадат) – 100× разтвор (0,1 М), съхраняван при
−80 C. Крайна концентрация в суспензионния буфер: 1 mM.
Водна баня
Клатачна машина с термостат Thermomixer Comfort (Eppendorf)
4.2. За концентриране на кондиционирани среди и специфично разцеп-
ване на наличния в тях остеопонтин
Епруветки за концентриране на протеини Amicon Ultra-15, чиито мембрани
задържат протеини с молекулна маса над 10 000 (Millipore; кат. № UFC901008)
330
За 100 ml:
NaCl 0,584 g
Трис.HCl 0,1576 g
EDTA 0,03722 g
dd H2O до 100 ml
За 80 ml:
1 M Трис.HCl, pH 6.8 10 ml
10% SDS 40 ml
глицерол 20 ml
dd H2O до 80 ml