PhD Thesis_ver3.pdf

Сравнително in vitro изследване на нови възможности за фармакологично повлияване на
мултипления миелом
Erufosine, µM:
6 h
0 5 10 20 40
14 h
0 5 10 20 40
Фиг. IV.51. Въздействие на Erufosine върху нивата на фосфорилираните (активните)
форми на ключови сигнални протеини в миеломни клетки U-266. Клетките са
третирани с еруфозин в концентрации до 40 µМ за период от 6 или 14 часа, след
което са лизирани и са анализирани чрез имуноблот. Контрол върху равномерността
на нанасяне на пробите е проведен чрез сравняване на нивата на убиквитерния
протеин β-актин в отделните проби. Изследвани са и общите нива на някои
от сигналните протеини (Akt, JNK и ERK) с цел да се провери дали се запазват
постоянни в отделните проби.
Получените резултати за клетъчна линия OPM-2 са представени на фиг. IV.52.
(снимки на блотовете) и на таблица IV.3. (денситометрични данни). Наблюдава се де-
фосфорилиране на p-Akt (Ser473) под действие на еруфозина. В клетките, третирани с 5
µM Erufosine за 6 часа, нивото на p-Akt е 2,5 пъти по-ниско от контролното и продъл-
жава да спада с нарастване на концентрацията на еруфозина. По-дългото въздействие
(14 часа) оказва по-силен ефект, като в случая 20 µM Erufosine води до пълно дефосфо-
рилиране на p-Akt. Еруфозинът освен това предизвиква фрагментиране и разграждане
на Akt – ефект, който също е концентрационно-зависим, и се наблюдава при минимал-
на концентрация от 10 µM. Наблюдаваният фрагмент от Akt е с молекулна маса около
44 kDa. Успоредно с разграждането на Akt настъпва разграждане на по-високомолекул-
ните форми (54 kDa) на киназата JNK и при двете времена на въздействие, както и на
по-нискомолекулните ѝ форми (46 kDa), но само при 6-часово въздействие с еруфозин.
Точно обратното, в 14-часовите проби нивото на 46 kDa JNK се вдига до 5 пъти. В 6-ча-
214
p-Akt1/2/3 (Ser473) (56/60 kDa)
Akt1/2/3 (56/60 kDa)
p-JNK1/2/3 (Thr183/Tyr185) (46/54 kDa)
JNK1/2/3 (46/54 kDa)
p-c-Raf (Ser338) (74 kDa)
p-MEK1/2 (Ser217/221) (45 kDa)
p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (42/44 kDa)
ERK1/2 (42/44 kDa)
p-p90RSK (Ser380) (90 kDa)
p-STAT3α/β (Tyr705) (79/86 kDa)
β-актин (42 kDa)