PhD Thesis_ver3.pdf

IV. Резултати – Механизъм на действие на изследваните вещества
Съвкупността от представените експериментални данни показва, че еруфозинът,
куркуминът и мелфаланът индуцират промени в някои сигнално-трансдукционни
пътища при миеломни клетки. Тези промени включват:
- дефосфорилиране и фрагментиране на киназата Akt;
- фосфорилиране на киназата JNK;
- преходно активиране на сигналния път Raf/MEK/ERK, последвано от фрагмен-
тиране на МЕК;
мин.
- снижаване на нивото на р65-субединицата на NF-κB след въздействие с курку-
2.3. Въздействие върху мембранните липидни рафтове
Клетки OPM-2 и RPMI-8226 бяха третирани с Erufosine (5 или 10 µМ) за 12 или 40
часа. След това от клетките бяха приготвени микроскопски препарати и ганглиозид
GM1-съдържащите мембранни липидни рафтове бяха визуализирани чрез оцветяване с
CTxB-FITC. Получените резултати са представени на фиг. IV.57. Вижда се, че плът-
ността на липидните рафтове е по-голяма в третираните клетки, отколкото в контрол-
ните. Промените в клетки OPM-2 са много по-отчетливи след третиране с 10 µМ еру-
фозин (снимка В), отколкото с по-ниската концентрация (5 µМ; снимка Б). По дългото
излагане на действието на еруфозина също е свързано с по-силен ефект, както може да
се види при сравняване на клетки RPMI-8226, третирани с 10 µМ Erufosine за 12 часа
(снимка Д) или 40 часа (снимка Е).
Клетки OPM-2 бяха третирани с 10 µМ Erufosine за 24 часа, след което бяха лизира-
ни и подложени на ултрацентрофугиране в захарозен градиент. Отделените фракции
бяха анализирани чрез имуноблот за съдържание на някои сигнални протеини
(Fas/CD95, Akt и прокаспаза-8, вкл. активните ѝ фрагменти). Получените резултати са
представени на фиг. IV.58. Вижда се, че еруфозинът предизвиква преразпределяне на
изследваните сигнални молекули. В пробите от нетретирани клетки значителна част от
общите количества Fas/CD95 (известен още като „рецептор на смъртта”), прокаспаза-8
и Akt (известен още като протеин-киназа B) се открива във фракциите от 4. до 7., в кои-
то типично се концентрират липидните рафтове. В пробите от третирани с еруфозин
клетки тези протеини се откриват само в придънните фракции на захарозния градиент,
т.е. еруфозинът предизвиква отделяне на споменатите протеини от липидните рафтове.
225