Hereditäre Tumorsyndrome des Kolons und Rektums

3. Material und Methoden
3.1. Präparation und Asservierung der Proben
Der Erfolg der Proteinanalyse hängt ganz entscheidend von der Qualität der
Proteinprobe ab. Die Integrität der Proteine, insbesondere die posttranslationale
Modifikation, sollte unverändert erhalten bleiben. Neben der Inaktivierung von
Proteasen ist die Hemmung von Phosphatasen und Glykosidasen bei der
Asservierung der Proben sicherzustellen.
In der Klinik für Chirurgie, Campus Lübeck konnten mehr als 200 Proben aus
Resektaten des Kolorektums und der Leber entnommen werden. Sämtliche
Patienten waren am Universitätsklinikum Schleswig Holstein, Campus Lübeck
operiert worden. Nach einer gründlichen mechanischen Reinigung des resezierten
Darms und Spülung mit NaCl wurden unter Aufsicht eines Pathologen
Gewebeproben entnommen. Dabei wurden gesunde Kolonschleimhaut (etwa
4cm²), Polypen und, wenn vorhanden, Karzinomgewebe asserviert (Abb.8)
Abb.8: Probengewinnung von einem Resektat (Normalmukosa, Polyp, KRK und
Metastase) zur intraindividuellen Expressionsanalyse
3.1.1. Franzén-Technik („Cell enrichment“)
Die Zellen werden durch Abkratzen („scraping“) der Mukosaoberfläche in nichtnekrotischen
Gewebearealen gewonnen und direkt in 5ml eiskalter RPMI-1640
Kulturlösung, welche mit 5% fetalem Kälberserum und 0,2nM
Phenylmethylsulfonyl Fluorid / 0,83nM Benzamidin angereichert ist, gebracht. Der
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