Hereditäre Tumorsyndrome des Kolons und Rektums

Die SDS Polyacrylamid Gele haben eine Größe von 1,5 x 200 x 230 mm. Sie
bestehen aus 12,5% Polyacrylamid. Zur Herstellung eines Gels wird eine
Grundlösung aus 376nM Tris Puffer (pH 8.8), 10% SDS und zweifach destilliertem
Wasser benutzt. Zur Polymerisation wird 10% Ammonium Persulphat und TEMED
hinzupipettiert. Nach Auffüllen der Gelkassetten müssen die Gele über mindestens
60 Minuten polymerisieren. Die equillibrierten IPG-Streifen werden am oberen
Rand des jeweiligen Gels positioniert und mit flüssigem Agarosegel in ihrer
Position fixiert. Dabei ist darauf zu achten, dass sich keine Luftblasen zwischen
dem IPG-Strips und dem Gel festsetzen, die einen Übertritt der Proteine in die
SDS PAGE verhindern. Im Anschluss laufen die Gele mit 42000 Vh über Nacht.
Nach Beendigung der Elektrophorese werden die Gelkassetten geöffnet und die
Gele geborgen. Hiernach ist die Visualisierung der separierten Proteinspots durch
eine Vielzahl von Färbetechniken möglich. In der vorliegenden Arbeit erfolgte die
Färbung der Proteinspots mit Silbernitrat, da dieses die höchste Sensitivität besitzt
125 .
200
Mr (kDa)
15
4,1 pI 6,9
Abb.13: Eingescanntes Gel eines Kolonkarzinoms mit bereits markierten
Proteinspots
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