Hereditäre Tumorsyndrome des Kolons und Rektums

Im Anschluss laufen die Gele für ~52900 Vh. Nach Beendigung der IEF sind die
Proteine entsprechend ihres pI aufgetrennt. Die großen Mengen an zugesetztem
CHAPS zur Solubilisierung vor der IEF stören den Übertritt der Proteine in das
SDS Gel der 2. Dimension und müssen entfernt werden. Deshalb werden die
fokussierten IPG-Strips vor dem Auftragen auf die SDS-PAGE für 30 min
equilibriert. Der Equilibrierungspuffer besteht aus 50nM Tris-HCL (pH8.8), 6M
urea, 30% Glycerol und 2% SDS (Abb. 11).
3.2.2. SDS Polyacrylamid Gelelektrophorese (2.Dimension)
Die SDS-PAGE Technologie ist eine der basalen Methoden moderner
Proteinanalytik. Die grundlegende Idee ist, alle Proteine nach kompletter
Denaturierung in einheitliche, vollständig entfaltete Polypeptidketten mit
gleichartigen Ladungseigenschaften zu überführen. SDS (Sodium-dodecylsulfat)
ist ein stark denaturierendes Detergenz, welches alle nicht kovalenten Bindungen,
die die Proteinstruktur bestimmen, aufhebt. Proteine mit großer Molekülmasse
bilden im Gegensatz zu solchen mit kleiner Masse lange Polypeptidfäden.
Längere Polypeptidfäden wandern aufgrund ihrer andersartigen
Wechselwirkungen mit dem „Netzwerk“ der Gel-Matrix (z.B. Reibung) langsamer
als kleine Proteine. Die SDS-PAGE trennt also Proteine nach ihrer Größe
(Abb.12).
Agarose Gel
2. Dimension
Polyacrylamig Gel
1. Dimension
mit IPG Streifen
Abb.12: Schematische Darstellung der 2. Dimension
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