Hereditäre Tumorsyndrome des Kolons und Rektums
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Anhang<br />
Reagenzien:<br />
Franzen Technik<br />
1. 5ml RPMI-1640<br />
(angereichert mit 5% fetales Kälberserum + 0,2nM Phenylmethylsulfonyl<br />
Fluorid / 0,83nM Benzamidin)<br />
2. Percoll Lösung (54,7% PBS)<br />
3. PBS Puffer pH 7,4<br />
1. Dimension: Isoelektrische Fokussierung<br />
1. 7M UREA<br />
2. 2M Thiourea<br />
3. 1% 3-(3-Chloramidopropyl) Dimethylammonio-1-propanesulfonate<br />
(CHAPS)<br />
4. 0,4% IPG Puffer<br />
5. 0,3% Dithiothreitol (DTT)<br />
2. Dimension: SDS Polyacrylamid Gelelektrophorese<br />
1. 376nM Tris Puffer 8pH 8,8)<br />
2. 10% Sodium-dodecylsulfat (SDS)<br />
3. 10% Ammonium Persulphat + TEMED (Polymerisation)<br />
Proteinfragmentierung zur Massenspektrometrischen Identifikation<br />
1. 100µl 50nM Amoniumbicarbonat/ 50% Acetonitrit<br />
2. 10mM DTT<br />
3. 30µl 5% Formic Acid/ 2% Acetonitrit<br />
4. 24µl 2,5% Formic Acid/ 50% Acetonitrit<br />
Entsalzen der extrahierten Proteine<br />
1. 10µl 70% Acetonitrit/ 0,1% Trifouressigsäure<br />
2. 10µl 50% Acetonitrit/ 0,1% Trifouressigsäure<br />
3. 10µl 0,1% Triflouressigsäure<br />
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