Hereditäre Tumorsyndrome des Kolons und Rektums

Technik liegt das Prinzip der Feinnadelaspirationstechnik nach Franzén zu
Grunde. Hier geht man davon aus, dass Tumorzellen leichter aus dem
Gewebeverband lösbar sind als ihr mechanisch stabileres umgebendes
Bindegewebe (Abb. 9a+b). Auf dieser Basis wird der Zell–Mediummix mehrmalig
(10-15x) durch eine grosslumige Spritzenkanüle eingesaugt und wieder
ausgepresst. Hierdurch lösen sich die Malignomzellen leicht aus dem Zellverband
und werden mit der Kulturlösung vermischt.
Fibroblasten
Franzén Technik
Filtration
Tumorzellen Fibroblasten +
Bindegewebe
Filter
Tumorzellen
Giemsa Färbung
Abb.9 a + b: Franzén-Technik zur Gewinnung reiner Zellpellets („Cell
enrichment“)
Anschliessend wird die Lösung mit den mechanisch dislozierten Tumorzellen und
den Bindegewebsfragmenten durch ein Filtersystem bestehend aus zwei
aufeinanderfolgenden Nylonfiltern mit Porengrößen von 250µm und 100µm
hindurch filtriert, um die Bindegewebsfragmente von der Tumorzellsuspension zu
trennen.
Unter die so gewonnene Zellsuspension werden 2ml einer eiskalter Percoll-
Lösung (54,7% in PBS) gegeben und mit 2430 U/min für 10 Minuten bei 4° C
zentrifugiert. Das Zellpellet wird an der Trennschicht zwischen Percoll- und RPMI-
Lösung gut sichtbar und kann mit einer Spritze abgesaugt werden (Abb.10).
Hiernach werden die gewonnenen Zellen zweimal mit kaltem PBS-Puffer pH 7,4
gewaschen. Diese Methode führt zu einer gereinigten Zellpopulation. Ihre Validität
wird durch Ausstrich mit Giemsafärbung durch einen Pathologen auf
Repräsentativität geprüft 115-117 . Nur solche Proben werden evaluiert, die einen
Anteil an „Zielzellen“ (also Tumor-, Adenom- oder Normalzellen) von >90%
aufweisen. Anschliessend wird das Probenpellet gewogen, in ein beschriftetes
Röhrchen gegeben und bei -80 Grad Celsius eingefroren.
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