Simone Canabarro Palezi - UFSM

4.2.3. Determinação do Conteúdo de Fenólicos totais
Para a determinação de fenólicos totais utilizou-se o método de Folin-Ciocalteu
descrito por Singleton et al. (1999) e adaptado por Pereira , (2009). Uma alíquota (0,5 mL) da
solução estoque foi misturada a 2,5 mL de reagente de Folin-Ciocalteu 0,2 N (após essa
adição aguardou-se 5 minutos). Adicionou-se 2 mL de solução de carbonato de sódio
(Na2CO3) 7,5%. Após a incubação a temperatura ambiente (25ºC) por 2 horas, a absorbância
foi medida a 760 nm em espectrofotômetro e comparada com a curva de calibração de ácido
gálico (faixa de 0 - 15 mg/L): Y = 0,0464x + 0,006, onde Y é a absorbância e x é a
concentração; R 2 = 0,9962. Os resultados foram expressos como mg equivalente de ácido
gálico por grama de extrato (mg EAG/g). As análises foram realizadas em triplicata e os
valores são apresentados como a média (± desvio padrão).
4.2.4 Determinação do Conteúdo de Flavonóides Totais
O conteúdo total de flavonóides foi determinado usando o método colorimétrico
utilizado por Pereira (2009) adaptado, onde, 0,25 mL da solução estoque adequadamente
diluída foi misturada a 1,25 mL de água deionizada e a 75 µL de nitrito de sódio (NaNO3)
5%. Após 6 minutos, adicionou-se então 150 µL de tricloreto de alumínio (AlCl3) 10% e
aguardou-se 5 minutos. Adicionou-se então 0,5 mL de hidróxido de sódio (NaOH) 1 mol e 2,5
ml de água deionizada. Após agitação a absorbância foi lida imediatamente a 510 nm em
espectrofotômetro e comparada com a curva de calibração de (+)-catequina (faixa de 0 - 20
mg/L): Y = 0,0128x – 0,00015, onde Y é a absorbância e x é a concentração; R 2 = 0,9965. Os
resultados foram expressos como mg equivalente de (+)- catequina por grama de extrato (mg
ECAT/g). As análises foram realizadas em triplicata e os valores são apresentados como a
média (± desvio padrão).
4.2.5 Atividade antioxidante in vitro
A metodologia utilizada foi descrita por Brand-Williams et al. (1995) com adaptações.
Esta fundamenta-se na capacidade de sequestro do radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH)
em 517nm. A técnica consistiu na incubação por 30 minutos, de 500 μL de uma solução
etanólica de DPPH 0,1 mM com 500 μL de soluções contendo concentrações crescentes de
extrato hidroetanólico de marcela (Achyrocline satureioides) (0,02; 0,04; 0,09; 0,2; 0,3; 0,6;
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