Ataxie mit okulomotorischer Apraxie Typ 2: Charakterisierung des ...

Ergebnisse 23
4. Ergebnisse
Diese Arbeit befasst sich mit der Mutationssuche im SETX-Gen von Betroffenen und dem
Nachweis zahlreicher Punktmutationen, kleinerer Deletionen und einer Spleißmutation
sowie von zuvor selten beschriebenen größeren intragenen Deletionen und einer ~1,3 kb-
Insertion, die eine ganz neue Mutationsvariante für die AOA2 darstellt.
Ergänzend wurden Untersuchungen an Kontrollproben zur Abschätzung der Frequenz
detektierter Sequenzvarianten durchgeführt. Hierfür wurden 50 bzw. 100 DNA-Proben auf
das Vorhandensein verschiedener Missense-Veränderungen getestet, um herauszufinden,
ob es sich bei diesen Sequenzveränderungen um Mutationen oder Normvarianten
(Polymorphismen) handelt.
Um die Frage zu klären, ob gleiche Mutationen in DNA-Proben von nicht verwandten
Patienten auf einen gemeinsamen Ursprung zurückzuführen sind, wurden die Haplotypen
für den 5,4 cM Bereich zwischen den Kopplungsmarkern D9S159 und D9S1793 auf
Chromosom 9 bestimmt.
Weiter wurden Expressionsanalysen zum Nachweis veränderter Spleißprodukte
durchgeführt.
4.1 Mutationssuche
Zunächst wurden für 79 DNA-Proben von Patienten mit klinischem Verdacht auf AOA2
die 24 kodierenden Exons des SETX-Gens mit Hilfe der PCR amplifiziert und anschließend
sequenziert. Um nach umfangreichen Genveränderungen zu suchen, wurde bei elf dieser
DNA-Proben (P8, P9, P10 und P13-P20) zusätzlich eine Real-Time-PCR durchgeführt. Bei
Hinweis auf größere Veränderungen im SETX-Gen wurden ergänzend Bruchpunkt- und
RNA-Analysen durchgeführt.
Für 12 von 79 Patienten (P1 bis P12) konnten jeweils zwei Mutationen nachgewiesen
werden (siehe Tabelle 10, S. 37). Für die Patienten P13 bis P20, bei denen im ersten Screen
lediglich eine Mutation detektiert werden konnte, wurde zusätzlich die Sequenzierung der
nicht kodierenden Exons 1 und 2 des SETX-Gens sowie die Sequenzierung von ~500
Basen des 5’-UTR-Bereiches durchgeführt.