Ataxie mit okulomotorischer Apraxie Typ 2: Charakterisierung des ...

Ergebnisse 35
(Fragment 9, Abb. 7b, S. 31). Die Deletion von Exon 11 bis 15 verursacht einen
Leserasterverschub und führt auf Protein-Ebene zu einem verkürzten Protein
(p.V1759EfsX6). Die Sequenzierung zeigte, dass es sich bei der schwachen Bande
(Fragment 8) um einen Heteroduplex aus den anderen beiden Transkripten handelt. Da für
Patient P10 keine RNA-Proben von Familienangehörigen vorhanden waren, wurde bei der
RT-PCR eine RNA-Kontrolle mitgeführt. Für diese RNA-Kontrolle konnte nur das 1106
bp-Fragment nachgewiesen werden, das dem Wildtyp-Transkript entspricht.
Für die weitere Analyse stand eine DNA-Probe der Mutter M10 von Patient P10 zur
Verfügung. Die Mutter M10 ist heterozygote Trägerin der 4 bp-Deletion in Exon 10 des
SETX-Gens, während die Deletion der Exons 11 bis 15 nicht nachgewiesen werden konnte.
Patient P11
Bei Patient P11 ließen sich die Exons 11 bis 15 des SETX-Gens nicht amplifizieren. In den
anderen Exons konnte keine krankheitsursächliche Mutation nachgewiesen werden.
Bruchpunkt- und RNA-Analysen P11
Bruchpunkt- und RNA-Analysen bestätigten, dass Patient P11 homozygot für die ~20,7 kb
große Deletion ist, die auch bei Patient P10 nachgewiesen werden konnte
(c.5274+13396_6107-3547del20729bp, p.V1759EfsX6). In der Agarose-Gelelektrophorese
der RT-PCR-Produkte zeigte sich bei Patient P11 nur das 274 bp-Transkript (Fragment 9,
Abb. 7a und 7b, S. 31).
Zur weiteren Abklärung dieser Mutation standen DNA-Proben der Eltern (Mutter M11 und
Vater V11), sowie eine RNA-Probe der Mutter zur Verfügung. An beiden DNA-Proben
konnte das bruchpunktüberspannende PCR-Produkt, sowie die Exons 11 bis 15 des SETX-
Gens amplifiziert werden. Das ließ darauf schließen, dass die Mutter M11 und der Vater
V11 von Patient P11 heterozygote Träger der ~20,7 kb-Deletion sind und konnte
nachträglich durch eine Sequenzierung bestätigt werden. Für die Mutter M11 konnte dies
zusätzlich durch eine RT-PCR abgesichert werden. Das RT-PCR-Produkt der Mutter M11
wies neben dem 1106 bp großen Wildtyp-Transkript (Fragment 7) das 274bp-Transkript
mit der Deletion auf (Fragment 9, Abb. 7a und 7b, S. 31).
Patient P12
Patient P12 ist heterozygot für eine Transition von Adenin zu Guanin in Exon 10 des
SETX-Gens. Diese Basensubstitution an Position 971 der cDNA hat einen Austausch von