Ataxie mit okulomotorischer Apraxie Typ 2: Charakterisierung des ...

Ergebnisse 36
Tyrosin zu Cystein in der Aminosäure-Sequenz zur Folge (c.971A>G, p.Y324C). Eine
weitere Sequenzveränderung im SETX-Gen wurde bei der Sequenzierung nicht entdeckt.
Die nachfolgend durchgeführte MLPA-Analyse, die mittlerweile etabliert wurde, lieferte
jedoch einen Hinweis auf eine heterozygote Deletion der Exons 18 bis 26 des SETX-Gens
(Abb. 9, S. 36).
a
b
Abb. 9: MLPA-Analyse bei Patient P12.
(a) Balkendiagramm der Patienten-DNA (grün) im Vergleich zu einer Kontroll-DNA
(blau).
(b) Ergebnis der MLPA-Analyse: für die Exons 18 bis 26 kann nur 50% Produkt
nachgewiesen werden, d.h. hier liegt eine heterozygote Deletion vor.
Bruchpunktbestimmung P12
Zur Bruchpunktbestimmung wurde das Intron 17 und der Bereich 3’ des SETX-Gens
mittels Primer-Walking näher untersucht. Hierfür wurden nach und nach 8 Primerpaare
generiert, um den Bruchpunkt immer weiter einzugrenzen. Letzten Endes konnte so auch
für Patient P12 ein bruchpunktüberspannendes PCR-Produkt amplifiziert werden (Tabelle
7, S. 12). Die Sequenzierung dieses PCR-Produktes führte zum Nachweis einer ~26,8 kb
großen Deletion, die von einer 2 bp-Insertion begleitet wird. Diese komplexe Veränderung
führt dazu, dass ab Position c.6325-361 im Intron 17 der Rest des SETX-Gens deletiert ist
(AL159997.14:g.48148_74944del26797bpinsAG). Die 3’-Bruchstelle liegt zwischen dem
SETX- und dem NTNG2-Gen, die in entgegengesetzten Orientierungen zueinander
angeordnet sind (Abb. 10, S. 37). Die Sequenzanalyse mit dem RepeatMasker-Programm