Synthèse de composés organométalliques et évaluation de leurs activités biologiques....

2.3.3.2.2. Milieux de cultures utilisés
2.3.3.2.2.1. Milieu liquide
Essais biologiques
Le milieu liquide utilisé pour la préparation des cultures microbiennes, des inoculums et la
détermination de la CMI, est un milieu reconstitué à partir des constituants du milieu PCA
sans ajout de l’agar (tryptone (5g), extrait de levure (2,5g), glucose (1g)).
2.3.3.2.2.2. Milieu solide
Le milieu solide utilisé pour la détermination de la CMB est le milieu PCA dont la
composition pour un litre est la suivante : tryptone (5g), extrait de levure (2,5g), glucose (1g)
et agar bactériologique (12g).
2.3.3.2.3. Préparation de l’inoculum
Une culture microbienne est préparée par repiquage d’une colonie de la souche à tester dans
100 ml de milieu liquide.
Après incubation 20 heures à 30°C, 200 µl sont prélevés et dissous dans 50 ml du même
milieu pour constituer l’inoculum.
Pour estimer la concentration microbienne de l’inoculum, des dilutions décimales sont
effectuées puis ensemencées par stries, sur milieu solide, dans une boite de Pétri.
2.3.3.2.4. Détermination de la CMI
Des solutions dans l’éthanol, de concentration 2 mg/ml pour les produits à tester ont été
préparées.
Dans le premier tube, contenant 1,6 ml de milieu de culture liquide, d’une série de 5 tubes à
essai sont introduit 400 µl de la solution du produit à tester. Des dilutions au ½ sont effectuées
par transfert de 1ml du premier tube au second, puis de ce dernier au suivant et ainsi de suite.
U.P.M.C./U.S. 115
2010