Synthèse de composés organométalliques et évaluation de leurs activités biologiques....

3.4. Partie expérimentale
3.4.1. Isolement et caractérisation des isolats d’Agrobactérium tumefaciens
3.4.1.1. Isolement de la bactérie
Cancers végétal et animal
Les échantillons sont lavés à l'eau courante afin d'enlever les particules de sol adhérentes aux
galles. Les galles sont, par la suite, désinfectées à l'eau de javel (0.5%) et lavées à l'eau
distillée stérile.
Des fragments sont coupés aseptiquement et placés dans un mortier contenant de l'eau
distillée stérile. La suspension obtenue est laissée à la température ambiante pendant 30
minutes. L'isolement a été effectué sur le milieu Mannitol-Glutamate (Annexe 2 .1)
additionné de tellurite de potassium (Mougel, C. et al., 2001). Les boites de Pétri inoculées
sont incubées à la température de 28°C.
3.4.1.2. Identification des biovars
Les isolats obtenus et ayant la forme et la consistance des agrobactéries ont subit quelques
tests biochimiques conformément aux méthodes décrites par Moore et al. (1988). Ces tests
regroupent: la coloration GRAM, production d'uréase, l'hydrolyse de l'esculine et la
production de 3 cétolactose.
3.4.1.2.1. La coloration de GRAM
La coloration Gram est la coloration de base de la bactériologie. C’est une coloration double
qui permet de différencier les bactéries, non seulement d’après leur forme mais également
d’après leur affinité pour les colorants. Les bactéries sont imprégnées par une première
solution colorante, violet de gentiane ; puis fixées par un mordant, solution iodo-iodurée de
Lugol et on fait ensuite agir un décolorant (alcool le plus souvent). Suivant la composition de
leur paroi :
� Certaines bactéries résistent à cette décoloration elles sont dites Gram positif et
apparaissent colorées en violet ;
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2010