Analysen des hämatopoetischen Chimärismus - TOBIAS-lib ...

3.7.3 Einstellungen des ABI PRISM 310 System
Für die Auftrennung der DNA-Fragmente wird das POP-4-Polymer, eine 47 cm
lange Kapillare und der 10 X 310 GA Buffer mit EDTA nach den Empfehlungen des
Herstellers verwendet.
Folgende Parameter werden für die Läufe eingestellt:
• Injektionszeit: 5 s
• Injektionsenergie: 15.0 kV
• Temperatur: 60 °C
• Zeit pro Lauf: 18 min
Wenn die Analyse unter diesen Einstellungen in den Subpopulationen keine Ergeb-
nisse erbringt, wird ein erneuter Versuch mit einer verlängerten Injektionszeit von
10 sec vorgenommen oder die DNA-Menge für die Analyse verdoppelt.
3.8 Auswertung der Daten
Die Analyse der Rohdaten erfolgt mit der Software von GeneScan 3.1 ® und die
Auswertung des Chimärismus mit der GenoTyper ® Software (Perkin- Elmer, Foster
City, USA). Die Ergebnisse werden als Kurvendiagramm dargestellt. Die DNA-Pro-
dukte werden abhängig von der Signalintensität und der Fragmentlänge als Integral
dargestellt. Aus dem Größenverhältnis der berechneten Flächen ergibt sich das
anteilige Verhältnis zwischen Spender und Empfänger.
Das Ergebnis wird im Vergleich mit den ursprünglichen Spender- und Empfänger-
proben bewertet und in prozentualen Anteilen angegeben [58].
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