Analysen des hämatopoetischen Chimärismus - TOBIAS-lib ...

3.1 Untersuchungsmaterial...............................................................................17
3.2 Zusammenfassende Übersicht ..................................................................17
3.3 Isolierung der mononuklearen Zellen aus dem Knochenmark..............17
3.4 DNA-Isolation aus den Nativproben von Spender und Patient..............18
3.4.1 DNA – Isolation ..............................................................................................19
3.4.2 Spektrophotometrische Bestimmung der DNA-Quantität .............................19
3.5 Isolierung der Subpopulationen mit Hilfe des „MACS“..........................20
3.5.1 Prinzip der „Magnet-aktivierten-Zellsortierung“ .............................................20
3.5.2 Isolation der Subpopulationen .......................................................................20
3.6 Floureszenz-markierte-STR-PCR...............................................................22
3.6.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion.........................................................22
3.6.2 Short-tandem-Repeats...................................................................................23
3.6.3 Primerauswahl................................................................................................23
3.6.4 PCR-Probenansatz........................................................................................23
3.6.5 Thermocyclerprogramme...............................................................................24
3.7 Die Kapillarelektrophorese .........................................................................25
3.7.1 Prinzip der Elektrophorese und die Verarbeitung der Daten ........................25
3.7.2 Probenansatz für die Kapillarelekrophorese .................................................25
3.7.3 Einstellungen des ABI PRISM 310 System...................................................26
3.8 Auswertung der Daten ................................................................................26
3.8.1 Berechnung des Chimärismus ......................................................................27
3.8.2 Einteilung der Chimärismusgruppen .............................................................31
3.9 Real-Time-PCR .............................................................................................31
4 Patientenkollektiv..............................................................................................32
5 Ergebnisse .........................................................................................................38
5.1 Überblick über die Probenverteilung ........................................................38
5.1.1 Ereignisfreies Überleben in Abhängigkeit von der Erkrankung ....................38
5.2 Beispielhafte Darstellungen von Krankheitsverläufen ...........................39
5.2.1 Tabellarischer Überblick über die Krankheitsverläufe...................................39
5.2.2 Ergebnisse der Patienten in kompletter Remission ......................................40
II