Analysen des hämatopoetischen Chimärismus - TOBIAS-lib ...

6 Diskussion
6.1 Methode
6.1.1 STR-PCR
Aufbauend auf vorangegangenen Untersuchungen von Bader et al., ist auch in
dieser Arbeit die STR-PCR für die Analysen des Chimärismus verwandt worden
[12]. Die Limitationen und Fehlerquellen dieser Methode sind ausführlich von
Kreyenberg et al. beleuchtetet worden. Lion et al. haben in einer Multi-Center-
Studie die Reproduzierbarkeit von STR-PCR-Ergebnissen verschiedener Forscher-
gruppen untersucht [58;63].
Für die Isolation der Subpopulationen ist in dieser Untersuchung die MACS-Metho-
de herangezogen worden. Die Sensitivitätsschwelle, die in unserem Labor für
Minorpopulationen erreicht wird, liegt zwischen 0,8 und 6,2 %, die mittlere Sensiti-
vität beträgt 3 %. Die erzielte Reinheit wird zwischen 80 und 98 % angegeben
[20;58;67].
Die Grundlage für die Analysen stellen kernhaltige Zellen dar. Während einer Kno-
chenmarkspunktion besteht deshalb die Gefahr der Verunreinigung der Probe
durch patienteneigene Stromazellen. Diese können zu falsch positiven Ergebnissen
führen. Durch die Positiv-Selektion der Subpopulationen und dem Effekt, dass nicht
markierten Zellen eliminiert werden, wird diese Fehlerquelle behoben [67]. Es sinkt
jedoch die DNA-Ausbeute der Probe, so dass die für die Analysen benötigte Menge
von 50 - 100 ng an DNA häufig nicht gewährleistet werden kann. Die CD34-
Subpopulation ist hiervon am stärksten betroffen. Sie bildet mit nur 0,5 bis 3 % den
kleinsten Anteil an den Knochenmarkszellen [58;67]. Mit dem zunehmenden Alter
einer Probe kommt es zusätzlich zu einer Abnahme der exprimierten Oberflächen-
antigene, das sich ebenfalls negativ auf die Ausfallrate auswirkt. Durch die selektive
Betrachtung der einzelnen Zelllinien ist trotzdem eine Sensitivitätssteigerung der
Methode um 1 bis 2 Logarithmen zu erreichen [64;113]. Im Vergleich zu den Analy-
sen des Vollblutes liegt die Begründung in der spezifischen Anreicherung proliferie-
render autologer Zellen in den betroffenen Zell-Reihen, d. h. in einer anteiligen Zu-
56