DIAZ_CESAR_1167D.pdf

3.4.2. Determinación de las constantes de velocidad de asociación y de
disociación del extremo "más"
Para determinar la relación entre la velocidad de polimerización y la
concentración de BtubAIB, se analizó el cambio de longitud de los filamentos de
BtubAIB por 1 O minutos después de iniciada la observación con el microscopio y
a tres concentraciones de BtubAIB (Figura 22A-C). Debido a que el análisis de
las velocidades de polimerización se restringió a los filamentos que crecieron a
partir de las "semillas", la determinación de la velocidad de polimerización y por
ende, de la constante de asociación y de disociación se restringió al extremo de
rápido crecimiento o extremo "más" del filamento de BtubAIB . No fue posible
incrementar la concentración de la proteína para observar el crecimiento a partir
del extremo "menos", pues al aumentar la concentración de BtubAIB se hizo
muy difícil diferenciar a los filamentos del "background". Además, este análisis
sólo se realizó con una concentración de KCI 12,5 mM, pues a esta
concentración los filamentos son individuales y no se observó la formación de
manojos de filamentos. Se observó un incremento de la longitud de los
filamentos con el incremento de la concentración de BtubA/B (Figura 22A-C).
Con las tres concentraciones de proteína usadas se visualizó la fase de
catástrofe de los filamentos y la fase de rescate, la que a diferencia de la
catástrofe, sí parece aumentar con el incremento de la concentración de
BtubAJB. No hay forma de predecir cuándo va a ocurrir una transición de una
fase en particular, es decir, no se puede establecer que un filamento de BtubA/B
crece o se acorta en una distancia determinada antes de experimentar otra
transición abrupta. Además, la duración de la elongación y el acortamiento varió
considerablemente entre los distintos filamentos de BtubAIB y también en un
mismo filamento. Se determinó la velocidad promedio de la elongación de los
filamentos de BtubAIB a partir de las pendientes de las rectas de elongación de
cada filamento, previas al primer evento de catástrofe. Así , la velocidad de
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