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Microscopía electrónica. Previamente se reportó que los polímeros o filamentos simples de BtubAIB no son microtúbulos, pero están formad os por dos protofilamentos similares a los formados por a/¡3-tubulina y FtsZ (Schlieper y cols. , 2005; Sontag y cols., 2005). Además, los filamentos simples forman manojos de polímeros de protofilamentos dobles. La mayoría de estos polímeros de protofilamentos dobles son rectos y poseen un giro repetitivo. Como se mencionó anteriormente, en estos dos trabajos se usó amortiguador de polimerización con KCI 200 mM o con KAc 350 mM, concentraciones salinas altas, que de acuerdo a lo descrito anteriormente, favorecerían la polimerización y la formación de manojos de filamentos . Para analizar la estructura de los polímeros que BtubAIB forma en presencia de las distintas concentraciones de KCI, se incubó BtubAIB 5 1-1M en amortiguador de polimerización, en ausencia y con diferentes concentraciones de KCI (25; 50; 100; 200 y 2.000 mM) y se adicionó GTP 1 mM para iniciar la polimerización. Después de 5 min de reacción , se tomó una alícuota de cada reacción y se tiñeron con tinción negativa con formato de uranilo y se obtuvo imágenes de las muestras usando microscopía electrónica. Se confirmó que los polímeros de BtubAIB corresponden a un par de protofilamentos rectos de aproximadamente 1 O nm de diámetro, que se entralazan entre sí, de manera similar a la actina, ParM y MreB. Los pares de protofilamentos interactúan entre si para formar manojos (Figura 1 OA). Estos manojos de filamentos carecen del empaquetamiento lateral regular de la pared de los microtúbulos y se asemejan más a los manojos de filamentos de FtsZ inducidos con calcio (Lu y cols. , 2000). En ausencia de KCI no se observó filamentos , pero el incremento de la concentración de KCI produjo un aumento en el número y largo de éstos, junto con la formación de manojos (Figura 1 OB). A 2 M de esta sal, los manojos contienen unos 7 filamentos y son más cortos, pues la proteína soluble disponible para polimerizar se hace limitante (Figura 1 OC). 53
e Figura 10. Microscopía electrónica del producto de la polimerización de BtubAIB en presencia de distintas concentraciones de KCI. BtubA/B 5 1-1M se polimerizó en amortiguador de polimerización a 25°C con GTP 1 mM, en presencia de distintas concentraciones de KCI y se tiñó con formato de uranilo 0,75%. Se visualizó por microscopía electrónica de transmisión. La concentración de KCI está indicada en cada figura. Barra= 100 nm. 54
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UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE FA
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Agradecimientos Quisiera agradecer
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• de Boer, P., Crossley, R. , y R
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• Heidemann, S. R. , y Wirtz, D.
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• MacNeal, R.K., y Purich , D.L.
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• Petroni, G., Spring, S., Schlei
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• Wachi, M., y Matsuhashi, M. (19
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eactantes. Por lo tanto, la constan
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A e k+ 2 8 velocidad de polimerizac
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