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DIAZ_CESAR_1167D.pdf

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lateralmente en vez de longitudinalmente con otro heterodímero, pues esto<br />

produce mayores zonas de contacto y se estabilizan mutuamente los<br />

monómeros de ambos heterodímeros. A medida que aumenta la concentración<br />

de KCI, se favorece la activación de los heterodímeros y las velocidades de<br />

asociación entre ellos aumentan, se introducen nuevas constantes de<br />

velocidades de nucleación y el tamaño del núcleo aumenta. Sin embargo, con<br />

esta aproximación no hay forma de saber, por ejemplo, si la formación de un<br />

tetrámero a partir de dos dímeros es un proceso más o menos favorable que la<br />

formación del trímero a partir de un dímero y un monómero. Para conocer<br />

exáctamente el mecanismo por el cual el KCI induce la formación de núcleos<br />

de mayor tamaño y como participa la formación del heterodímero en este<br />

mecanismo, es necesario modelar la cinética de polimerización de BtubA/B y<br />

ajustarla a los resultados experimentales para poder extraer las constantes de<br />

asociación y disociación de los distintos pasos que forman el núcleo,<br />

procedimiento que no se realizó en este trabajo de tesis.<br />

4.2.3. Elongación<br />

En esta etapa todos los agregados del tamaño del núcleo (n) o más<br />

grandes crecen por la adición secuencial de los monómeros a los extremos de<br />

los filamentos hasta que la concentración de monómeros baja hasta su valor en<br />

el equilibrio o estado estacionario. En este trabajo, esta etapa se analizó con<br />

los ensayos de dispersión de luz y con la observación de la polimerización de<br />

los filamentos individuales por microscopía confocal. Después de la etapa de<br />

latencia en ausencia de KCI y con KCI 3, 13; 6,25; 12,5 y 25,0 mM , la<br />

concentración de subunidades disminuye con una cinética exponencial de<br />

pseudo-primer orden (resultado no mostrado) lo que indica que la elongación<br />

procede a una concentración constante de filamentos de BtubA/8 y por lo<br />

tanto, la nucleación se completó en la etapa de latencia. Sin embargo, es<br />

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