DIAZ_CESAR_1167D.pdf

More documents

Recommendations

Info

3.3. Determinación de la polaridad cinética y estructural de los filamentos de BtubA/8 Una pregunta básica con respecto al ensamblaje de los polímeros del citoesqueleto es sobre la polaridad de crecimiento, es decir, si las subunidades se adicionan con igual velocidad a cualquiera de los dos extremos del filamento, como el homólogo bacteriano de la actina ParM (Garner y cols., 2004) o si el crecimiento es mayor en un extremo del filamento con respecto al otro, como los filamentos de actina y los microtúbulos. En el caso de BtubA/B, el análisis de la estructura cristalina mostró que los heterodímeros de BtubA/B se encuentran de forma alternada y continua en el cristal (que no corresponde a un fi lamento), y además, BtubA y BtubB polimerizan en cantidades equimolares (Schlieper y cols ., 2005), lo que indicaría que los filamentos de BtubA/B tienen polaridad estructural. Se investigó in vitro , por microscopía confocal, la polaridad de ensamblaje de los filamentos de BtubA/8. Se polimerizó filamentos de BtubA/B marcados con la sonda fluorescente TAMRA (roja) con un análogo no-hidrolizable de GTP (GMPCPP) y luego se adicionó BtubA/B marcada con la sonda Alexa Fluor 488 (verde). Esto se hizo en presencia de KCI a distintas concentraciones (Figura 18A). En presencia de KCI 25,0 mM (Figura 188) se observó claramente que la mayoría de los filamentos observados (90%) tenían un extremo rojo y el otro verde. Este resultado demuestra que, al igual que los microtúbulos eucariontes, el crecimiento de los filamentos de BtubA/B es polar o cinéticamente asimétrico. La polaridad se observó hasta una concentración de KCI 100,0 mM , pues por encima de ésta aparecieron filamentos amarillos que corresponden a manojos de filamentos. 77
A B Figura 18. Determinación de la polaridad de ensamblaje de los filamentos de BtubAIB. 78
Page 1:
UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE FA
Page 4 and 5:
Agradecimientos Quisiera agradecer
Page 6 and 7:
TABLA DE CONTENIDOS ÍNDICE DE TABL
Page 8 and 9:
ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Concentr
Page 10 and 11:
Figura 15. Determinación del tama
Page 12 and 13:
dn-; dt; v-: velocidad neta de elon
Page 15:
PIPES: ácido piperacín-N,N ·-bis
Page 19 and 20:
Besides, individual BtubAJB filamen
Page 21 and 22:
La primera proteína que se identif
Page 24:
Draber, 2006). Delta (ó) y épsilo
Page 28:
concentración mínima de proteína
Page 34:
subunidades, las constantes de velo
Page 37:
Una segunda propiedad que surge del
Page 42 and 43:
1.4. La división de bacterias Verr
Page 44: Figura 7. Micrografía electrónica
Page 48: Placas de agar-LB. Al medio líquid
Page 52 and 53: 2.2.4. Cuantificación de la tubuli
Page 54: amortiguador HE PES 50 mM (pH 7 ,0)
Page 57 and 58: 2.2.8. Microscopía electrónica Se
Page 59 and 60: 7. Se agregó 200 mL de etanol 70%
Page 61 and 62: 2. Se cortaron dos trozos largos de
Page 64: Microscopía Para observar una mues
Page 68: 3.2. Caracterización del efecto de
Page 71 and 72: Figura 9. Microscopía confocal del
Page 73: e Figura 10. Microscopía electrón
Page 78 and 79: Cinética de polimerización de Btu
Page 80 and 81: 10 6 M- 1 en presencia de KC\ 2,0 M
Page 83 and 84: Cinética de polimerización de Btu
Page 85: A B 500 J ---:-- 400 ro :::l - 300
Page 89 and 90: ..- >< -- 'CU E: ....._ -2,0 >< 'CU
Page 92 and 93: 3.2.2. Efecto de KCI sobre la activ
Page 94: sugiere que la formación de manojo
Page 100 and 101: elongación neta es más rá pida e
Page 102 and 103: especto a la polaridad del filament
Page 104: posible seguirlos individualmente,
Page 109 and 110: pues se sintetizaron con GMPCPP. Si
Page 111: 3.4.2. Determinación de las consta
Page 116: 3.4.3. Polimerización de BtubA/8 e
Page 120 and 121: 4. DISCUSIÓN La función celular d
Page 122 and 123: polimerización. Además, después
Page 124: de los filamentos indujo una intera
Page 127 and 128: concentración crítica no es conoc
Page 129: evidente que en la elongación part
Page 133 and 134: 4.4.1. Treadmilling De acuerdo a la
Page 135 and 136: polimerización y de despolimerizac
Page 138: 4.5. Significancia biológica del m
Page 141 and 142: es la hidrólisis de GTP. El "tread
Page 143 and 144: BIBLIOGRAFÍA • Abhayawardhane, Y
Page 145 and 146:
• de Boer, P., Crossley, R. , y R
Page 147 and 148:
• Heidemann, S. R. , y Wirtz, D.
Page 149 and 150:
• MacNeal, R.K., y Purich , D.L.
Page 151 and 152:
• Petroni, G., Spring, S., Schlei
Page 153 and 154:
• Wachi, M., y Matsuhashi, M. (19
Page 155 and 156:
sido agrupados en dos clases (Shih
Page 157 and 158:
campo magnético local o inducido (
Page 159:
Apéndice B: Análisis de la nuclea
Page 163 and 164:
eactantes. Por lo tanto, la constan
Page 165:
de equilibrio para la asociación d
Page 168 and 169:
A e k+ 2 8 velocidad de polimerizac
show all

DIAZ_CESAR_1167D.pdf

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?