DIAZ_CESAR_1167D.pdf

Placas de agar-LB. Al medio líquido LB se le agregó agar al 1%. Cuando se
necesitó, se suplementó con ampicilina 100 ¡.Jg/ml.
Cepas y plasmidios. Se utilizó la cepa de Escherichia coli XL 1 0-Gold
(Stratagene) para almacenar el plasmidio que codifica para la tubulina
bacteriana BtubAIB de Prosthecobacter dejongeii, el cual fue donado por el Dr.
Daniel Schlieper. BtubAB se encuentra bajo el control del promotor T7. Se
utilizó la cepa de Escherichia coli BL21 (ADE3) para sobre-expresar la proteína.
2.2. MÉTODOS
2.2.1 . Preparación de las células electrocompetentes
Las células aptas para la transformación (introducción de DNA foráneo)
o electrocompetentes, se prepararon a partir de un cultivo bacteriano en fase
exponencial de crecimiento. Para ello, se tomaron con un asa estéril células de
la cepa de Escherichia coli XL 1 0-Gold y de la cepa de Escherichia co!i
BL21 (ADE3) guardadas a -80°C y se sembraron por separado en una placa de
LB agarosa. Se utilizó la cepa de Escherichia coli XL 1 0-Gold para almacenar el
plasmidio que codifica para BtubAIB y la cepa de Escherich ia coli BL21(ADE3)
se utilizó para sobre-expresar la proteína. Después de crecer las bacterias en
la placa por 24 h a 3rC, se seleccionó una colonia y se puso a crecer las
bacterias en 1 O mL de medio LB por 24 h a 3rC y ag itación constante. 5 mL
de este cultivo se inocularon en 200 mL de medio LB y se pusieron a crecer las
bacterias con agitación constante a 3rC hasta alcanzar una D06oo entre 0,6-
0,7 (fase exponencial de crecimiento). Las células se cosecharon a 4.500 x g
por 10 min en tubos de 50 mL fríos, se descartó el sobrenadante y el
precipitado bacteriano obtenido se suspendió en glicerol al 1 O% frío mediante
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