DIAZ_CESAR_1167D.pdf

4.2.1. Concentración crítica
En los sistemas de polimerización cooperativos, la concentración crítica
representa no sólo la cantidad mínima de proteína necesaria para que ocurra la
polimerización, si no que también la máxima concentración de subunidades
que puede existir en una solución en el equilibrio con los polímeros y su valor
está determinado por la afinidad de las subunidades a los extremos del
polímero. En este trabajo se determinó que el incremento de la concentración
de cloruro de potasio produce una disminución de la concentración crítica (Ce)
de la polimerización (Figura 13; Figura 16), la que tiene un valor de 9,4 1-JM en
ausencia de KCI y un valor mínimo de 0,67 1-1M con KCI 2,0 M. Es necesario
recordar que la condición sin KCI aún contiene potasio proveniente de la
titulación del amortiguador HEPES-K y que cuando se utiliza la sal de sodio del
amortiguador no se observa polimerización a altas concentraciones de
proteína, lo que indica que el potasio es fundamental para que ocurra la
polimerización de BtubA/B. La disminución de la Ce indica que la cantidad de
proteína disponible para polimerizar es mayor o que la afinidad de la subunidad
por el polímero se incrementó, pues la Ce es igual a 1/ Kee (Kee es la constante
de equilibrio de asociación-elongación). A partir de los valores de la Ce se
calculó que el rango de los valores de Kee estuvo entre O, 12 x 10 6 M- 1 en
ausencia de KCI y 1 ,49 x 1 0 6 M- 1 a la concentración máxima de KCI 2,0 M. Con
KCI 100 y 200 mM se obtuvieron valores de Kee de 0,43 y 0,54 X 10 6 M- 1 ,
respectivamente. Así, KCI favorece fuertemente la asociación de subunidades
de BtubA/B durante la polimerización. De acuerdo a lo predicho por la ecuación
(2) , la disminución de la concentración crítica produjo un aumento del número
de filamentos que se formaron en la etapa de nucleación (Figura 9A; Figura 1 O;
Figura 18; Figura 198, C) y también se produjo un aumento de la velocidad de
polimerización de 1,54 ± 0,21 1-1m min- 1 con KCI 12,5 mM a 2,07 ± 0,2 1-1m min- 1
con KCI 100 mM (ecuación (6); Figura 190 y E) . El incremento de la densidad
104