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Cinética de polimerización de BtubAIB en presencia de KCI. De acuerdo a
lo esperado, la polimerización de BtubA/B en presencia de KCI 3,13 mM,
produjo un aumento de la intensidad de dispersión de luz (unidades arbitrarias,
u.a.), en comparación a las concentraciones equivalentes de proteína en
ausencia de KCI (Figura 11A) y se obtuvo polimerización de BtubAIB a una
menor concentración (8,44 1-JM) (Figura 12A) en comparación a sin KCI (11 ,25
¡.¡M). Las curvas muestran un comportamiento sigmoideo. De la misma forma,
el incremento de la concentración de KCI a 12,5 mM en el amortiguador de
polimerización produjo un aumento de la velocidad de polimerización y
aumentó el valor del máximo (Figura 128). Con KCI100,0 mM (Figura 12C), se
observó la polimerización de BtubA/B a una concentración de 3,46 1-JM . A
concentraciones mayores de proteína se observó una rápida polimerización y
un gran aumento de la intensidad de dispersión de luz, la que incluso se salió
de la escala a una concentración de BtubA/B 20 1-JM. Prácticamente no se pudo
observar una etapa de nucleación y las cinéticas de polimerización
aparentemente no son sigmoídeas, sino más bien parecen tener dos fases, una
muy rápida y una segunda un poco más lenta al aproximarse al máximo. Este
comportamiento probablemente se debe a la cinética de formación de los
manojos de filamentos de BtubA/B. Con KCI 500,0 mM (Figura 120), el
aumento de dispersión de luz es muy rápido y sólo se pudo analizar las curvas
bajo valores de concentración de BtubA/B 8,44 1-JM , pues valores más altos se
salieron de la escala de medición. A esta concentración de KCI se obtuvo
polimerización a partir de una concentración de BtubA/B 2,67 1-JM,
concentración a la cual se pudo apreciar claramente el período de nucleación.
A concentraciones mayores de BtubA/B hubo que aumentar la resolución en el
campo (hasta 3 min) para observar el período de nucleación (resultado no
mostrado). No se observó claramente en el período de elongación las dos
cinéticas que se observó en la Figura 12C y con KCI 200,0 mM (resultado no
mostrado). Sin embargo, las curvas no tienen una apariencia sigmoídea, lo que
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