DIAZ_CESAR_1167D.pdf

podría indicar que, en presencia de KCI 500,0 mM , la segunda cinética es la
que predominaría durante la elongación o una combinación de ambas (Figura
120). Por otro lado, se observa un "plateau" con el incremento de la
concentración de KCI (Figura 12C) cuando se alcanza el máximo de
polimerización y que es producto de una disminución de la velocidad de la
despolimerización, la que prácticamente no se observó a una concentración de
KCI 500,0 mM (Figura 120). Esta es una conducta propia de los microtúbulos.
Se determinó la concentración crítica de la polimerización de BtubAIB en
función de las distintas concentraciones de KCI, a partir del gráfico del cambio
del máximo de la intensidad de dispersión de luz en función de la
concentración de la proteína (Figura 13A) y cuyos valores se obtuvieron a partir
de las cinéticas de polimerización de BtubA/B de la Figura 12. Además , se
incluyó en el análisis las cinéticas de polimerización realizadas en presencia de
KCI: 6,25; 25,0; 50 ,0; 200,0; 1000,0 y 2.000,0 mM (cinéticas de polimerización
no mostradas). Se observan dos poblaciones de líneas rectas, una con menor
pendiente hasta KCI 50,0 mM y la otra con mayor pendiente entre KCI 100,0 y
500,0 mM (Figura 13A). Este cambio en la pendiente es propio de un cambio
en la forma de los polímeros que en este caso podría corresponder a una
primera población de filamentos simples formados por dos protofilamentos y
una segunda población de manojos de filamentos simples. El incremento de la
concentración de KCI disminuye la concentración crítica de la polimerización de
BtubA/8 (Figura 138 y Tabla 1 ). Este valor indica la mínima cantidad de
BtubA/8 necesaria para polimerizar. En otras palabras, el aumento de la
velocidad de cambio de la señal de dispersión y el aumento de la intensidad
máxima en el estado estacionario, en función de la concentración de KCI, se
deben a que hay más proteína disponible para polimerizar. Se calculó el valor
de la constante de equilibrio de asociación de BtubAJB con los extremos del
polímero (Kec ) en cada condición salina (Tabla 1) y se observó que ésta
aumenta de un valor de O, 12 x 10 6 M- 1 , en ausencia de sal, a un valor de 1 ,49 x
60