POSTĘPY CHROMATOGRAFII - Zakład Chemii Analitycznej

UKŁADY ADSORPCYJNE I ADSORPCYJNO-JONOWYMIENNEFAZ NORMALNYCHUkłady chromatograficzne faz normalnych nie znajdują tak szerokiegozastosowania do rozdzielania peptydów i białek jak układy faz odwróconychi jonowymienne. Yoshida i Okada [23] wykonali badania przydatności dorozdzielania peptydów kilku różnych wypełnień w układach faz normalnych.Stwierdzili przydatność kolumn wypełnionych związanym z żelem krzemionkowymsorbentem amidowym i diolem w warunkach elucji gradientowejAcCN – H 2 O, z rosnącym udziałem wody w trakcie programu elucji i z zastosowaniemkwaśnych modyfikatorów fazy ruchomej (TFA albo TFA+TEA),zwiększających retencję peptydów (rys. 5 – porównanie rozdzielania 10 peptydówna kolumnie amidowej i diolowej z różnymi dodatkami do eluentu)[23]. Odrzucili kolumny napełnione sorbentem aminowym (NH 2 ) i nitrylowym(CN) jako nieprzydatne do rozdzielania peptydów oraz kolumny z żelemkrzemionkowym jako powodujące obniżenie stopnia odzysku peptydów [23].Jednakże, należy zaznaczyć, że zastosowane warunki rozdzielaniaw wyżej wymienionych badaniach uniemożliwiają przeważanie efektu adsorpcyjnegomechanizmu charakterystycznego dla NP-HPLC. Zastosowaniebardzo polarnego eluentu prowadzi do mechanizmu rozdzielania charakterystycznegodla Chromatografii Oddziaływań Hydrofilowych (HILIC).Do rozdzielania białek i peptydów zastosowano też z powodzeniemkolumny wypełnione hydroksyapatytem, wykorzystując jednocześnie adsorpcyjnei słabe jonowymienne oddziaływania.126