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7 Diskussion
7.1.4 Der Einfluss von RAD auf Reifung und Funktion dendritischer
Zellen
Von unserer Arbeitsgruppe wurde bereits gezeigt, dass MPA keinen Einfluss auf die Reifung
und Genexpression der moDCs nach Konfrontation mit A. fumigatus hat , wenn es am Tag 2
oder 4 nach der Isolation dazugegeben wurde (Mezger et al., 2008-3). Allerdings hatte MPA
einen starken inhibierenden Einfluss bei Zugabe direkt nach der Isolation der Monozyten. Es
bewirkte eine Reduktion von CD40, CD80 und CD86 sowie eine verringerte Zytokin-
expression (IL12, IL10 und TNF-α) nach Stimulation mit LPS und eine geschwächte
Anregung naiver T-Lymphozyten durch moDCs (Mehling et al., 2000; Colic et al., 2003-2).
Diese Effekte wurden auf RAD getestet.
Wurden die Monozyten am Tag 2 oder 4 nach Isolation mit RAD (1 µM) behandelt, zeigte
sich kein Einfluss auf die Differenzierung, Reifung und das Expressionsprofil der DCs
(Blockhaus, 2010). Bei Zugabe von RAD direkt nach der Isolation der Monozyten jedoch
zeigten sich, ebenso wie bei MPA, starke Effekte auf DCs (Feodoric, Krishnan, 2008). Die
apoptotische Wirkung von RAPA nach 7 Tagen Generation der moDCs ist dosisabhängig,
jedoch nicht der Einfluss von RAPA auf die Reifung von CD40, CD80 und CD86 nach
Stimulation (Monti et al., 2003), weshalb mit der geringen Konzentration von 10 nM
(= 9,6 ng / ml) gearbeitet wurde. Diese Konzentration entspricht auch den in vivo
Bedingungen in Patienten, bei denen nach erfolgreicher Therapie Sirolimus in einer
Konzentration von 5 - 15 ng / ml im Blut nachgewiesen wurde (Hackstein, 2006; MacDonald
et al., 2000). Da RAD vor kurzem von der FDA zur klinisch eingesetzt werden darf, gibt es
auch erste Studien über die Pharmakokinetik von Everolimus, das im Serum der Patienten je
nach Dosis mit einer Konzentration von 5,4 - 13,2 ng / ml nachweisbar war (O'Donnell et al.,
2010; Saliba et al. 2011).
Nach 7 Tagen Behandlung mit RAD zeigten die moDCs die gleiche Expression an CD1a und
CD14. Im Gegensatz dazu war die Ausbildung von MHCII reduziert. Nach Konfrontation mit
dem Pathogen A. fumigatus oder LPS war die Expression von MHCII sowohl in RAD-DCs
als auch in den Kontrollzellen identisch. Daraus lässt sich folgern, dass RAD nicht die
Bildung von DCs aus Monozyten inhibiert.
Die Expression der kostimulatorischen Moleküle CD40, CD83 und CD86 zeigte eine
signifikante Reduktion. Nach Konfrontation mit A. fumigatus war CD40 verringert auf der
Zelloberfläche nachzuweisen. Da CD40 schlechter nach Konfrontation mit dem Pathogen
erhöht wird, kann vermutet werden, dass DCs CD8 + - und CD4 + -T-Lymphozyten
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