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6 Ergebnisse
6.6.2 Unterdrückung des CXCL10-Gens mittels siRNA
Da bei Patienten bereits nachgewiesen wurde, dass der Haplotyp, der einen Mangel an
CXCL10 zur Folge hat, das Risiko erhöht, an IA zu erkranken, wurde ebenfalls getestet, ob
der Knockdown des CXCL10-Gens einen Einfluss auf die pro-inflammatorische
Immunantwort auf A. fumigatus und die Reifung der DCs hat. Der Knockdown des CXCL10-
Gens wurde mittels Elektroporation von spezifischer siRNA in den Zellkern erreicht. Es
wurden zwei verschiedene siRNAs (Qiagen, D), CXCL10 (1) und CXCL10 (2), im Vorfeld
getestet, da sie nicht von der Firma Qiagen validiert waren. Der Abbau der mRNA des Gens
durch die siRNAs wurde mittels RT-PCR angeschaut und zudem wurde überprüft, ob auch
die tatsächliche Produktion des Proteins reduziert war.
Abbildung 6.22: Knockdown von CXCL10. (A) Expression von CXCL10 in unbehandelten moDCs,
nach Transfektion von siRNA CXCL10 (1) oder CXCL10 (2) bzw. der non silencing Kontrolle
normalisiert mit h-Alas. (B) Produktion von CXCL10 im Überstand gemessen mittels ELISA.
Mittelwerte ± Standardabweichung, n = 4; p-Werte aus Student's t zwischen Negativkontrolle
und behandelter Probe. Durchgeführt in Zusammenarbeit mit Dipl. Biol. Tanja Breitschopf.
Abb. 6.22 zeigt, dass CXCL10 (1) die mRNA von CXCL10 stark inhibierte (-80 % ± 12 %;
ns) und einen signifikanten Einfluss auf den Proteinlevel von CXCL10 im Mediumüberstand
hatte (-90 % ± 13 %; p = 0,006). Jedoch war kein solcher Effekt durch die siRNA
CXCL10 (2) oder der non silencing Kontrolle zu beobachten.
6.6.3 Effekte des CXCL10-Knockdowns auf die inflammatorische
Immunantwort und Reifung der moDCs
Um herauszufinden, ob die Reduktion von CXCL10 einen Effekt auf die inflammatorische
Immunantwort hat, wurden verschiedene Zytokine auf Expressionsebene getestet. Dazu
wurden moDCs nach 24 h Inkubation mit siRNA (CXCL10 (1), CXCL10 (2) oder non
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