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Durch die Analyse am Durchflusszytometer nach Färbung der Zellen mit den Antikörpern
CD1a, CD14 und HLA-DR (= MHCII) wurde überprüft, ob Monozyten unter dem 7-tägigen
Einfluss des RADs zu dendritischen Zellen ausreifen. Die Analyse weiterer Marker auf diesen
Zellen kann in Kapitel 6.4.3 nachgelesen werden.
Die moDCs bildeten eine einheitliche Population (Abb. 6.7A, B), die sich in der Region R1
befand. Die Zellen, die mit RAD behandelt worden waren, waren einheitlich kleiner und
weniger granulär als die Kontrollzellen, wie im SSC/FSC dargestellt ist. Dazu wiesen die
RAD-behandelten moDCs einen 5-fach höheren Anteil an toten Zellen auf, da RAD
signifikant (p < 0,001) mehr Apoptose in den Zellen ausgelöst hatte. Durch die Behandlung
mit EtOH waren 77 % ± 9 % der DCs lebend, durch die Behandlung mit RAD 59 % ± 22 %.
Das Histogramm der Fluoreszenzen (Abb. 6.7C, D) zeigt, dass die Expressionen der
Oberflächenmarker CD1a + und CD14 - der Kontrollzellen genau den RAD-DCs gleicht.
Abbildung 6.8: Fluoreszenzintensitäten des HLA-DR auf unreifen moDCs (0 h), nach 6 h,
12 h und 24 h Stimulation mit A. fumigatus oder LPS. Die Analyse erfolgte anhand
200 000 Zellen nach Färbung mit PE-markierten Antikörpern gegen die entsprechenden
Oberflächenmarker im Durchflusszytometer. Vermessen wurde die mittlere
Fluoreszenzintensität der Histogramme. Mittelwerte ± Standardabweichung, n = 3; p-Werte
aus Student's t Test zwischen der EtOH-Kontrolle und den RAD behandelten moDCs, ns =
nicht signifikant.
Außerdem wurde die Ausbildung und Hochregulation des Haupthistokompatibilitäts-
komplexes II (MHCII) bestimmt, da er für die Funktion der dendritischen Zellen in vivo, das
Immunsystem anzuregen, essentiell ist. Es zeigte sich, dass unreife RAD-DCs signifikant
weniger MHCII, der mittels HLA-DR-PE gemessen wurde, exprimierten (p = 0,002)
(Abb. 6.8). Aber nach Konfrontation mit A. fumigatus oder LPS fand sich ein erhöhter
Anstieg des HLA-DR in RAD-DCs, wodurch sich die Expression von MHCII den EtOH-DCs
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