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6 Ergebnisse
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6.1 Kontrolle der Reinheit der isolierten, primären Zellen
Während dieser Studie kamen verschiedene frisch isolierte, primäre Zellenpopulationen, die
entweder aus frisch abgenommenem Blut oder Leukozyten-Reduktions-System Kammern
(LRSCs) isoliert wurden, zum Einsatz (Tab. 5.1). Da die Isolation der einzelnen Zellen neu
optimiert wurde und es für diese Studie notwendig war, mit hochreinen Zellen zu arbeiten, ist
im Folgenden die Reinheit der Populationen charakterisiert über ihre Oberflächenmarker
aufgelistet.
Granulozyten wurden aus frisch abgenommenem Blut von freiwilligen Spendern mit
Dichtegradientenzentrifugation auf Polymorphprep aufgereinigt und mittels des spezifischen
Oberflächenmarkers CD66b auf ihre Reinheit getestet. Die Funktion von CD66b ist noch
unbekannt. Die Ausbeute betrug ca. 20 × 10 6 PMNs pro 9 ml Blut. Die Reinheit betrug
> 90 % (Abb. 6.1).
Abbildung 6.1: Analyse der aufgereinigten Granulozyten im Durchflusszytometer. Links:
Darstellung der Forward- und Sidescatter als Dot Plot eines exemplarischen Spenders. R1
markiert die Region der zur Analyse verwendeten Zellen. Rechts: Histogramm des CD66
Markers (blau) auf Granulozyten im Vergleich zur Isotypkontrolle (grün).
Im Großteil dieser Arbeit wurde mit moDCs gearbeitet. Dazu wurden Monozyten aus einer
LRSC isoliert, und über 5 bis 7 Tage durch Zugabe von IL4 und GM-CSF moDCs aus den
Monozyten generiert. Die Reinheit der Monozyten betrug mehr als 90 % und sie konnten als
stark CD14 positiv (Abb. 6.2 A) sowie leicht CD1a positiv definiert werden. Die Ausbeute
der Monozyten aus den PBMCs betrug 20 %. Nach 7 Tagen Generierung der moDCs betrug
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