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6 Ergebnisse
Deshalb wurde ein Wachstumsexperiment durchgeführt, worin überprüft werden sollte, ob
RAD in der eingesetzten Konzentration (= 10 nM) inhibitorische oder toxische Eigenschaften
besitzt. Dazu wurden kurze Keimschläuche von A. fumigatus 2 h mit RAD oder EtOH zur
Kontrolle inkubiert. Anschließend erfolgte eine Vermessung des Wachstums der
Keimschläuche am Fluoreszenzmikroskop. Gleichzeitig wurde die Anzahl der verbliebenen
Konidien überprüft.
Nach 2 h Inkubation waren die Keimschläuche mit Zusatz EtOH im Durchschnitt um 128 %
gewachsen, die Keimschläuche mit Zusatz RAD im Durchschnitt um 130 %. Es zeigte sich
somit kein signifikanter Unterschied im Wachstum der A. fumigatus Keimschläuche
(Abb. 6.5). Außerdem war die Anzahl der Keimschläuche in allen mikroskopischen
Aufnahmen vergleichbar. Dennoch war eine höhere Konzentration von RAD (= 10 µM)
durchaus in der Lage, das Wachstum der Keimschläuche zu inhibieren und auch die Zahl der
Keimschläuche zu reduzieren (Daten nicht gezeigt).
6.3 Einfluss von RAD auf neutrophile Granulozyten
Als Readout, um den Einfluss von RAD auf neutrophile Granulozyten zu bestimmen, wurden
Sauerstoffradikale gemessen. In einer früheren Studie (Mezger, 2007) wurde gezeigt, dass
1 µM RAD bei direkter Zugabe auf Neutrophile keinen Einfluss auf die Zellen hat, sowohl in
Bezug auf den oxidativen Burst als auch auf deren Fähigkeit, das Pathogen A. fumigatus
abzutöten. Deshalb wurde überprüft, ob nach einer Vorinkubation mit 1 µM RAD, zum
Vergleich mit der Studie von Mezger (2007), und mit 10 nM RAD, die in dieser Studie primär
verwendete Konzentration, ein inhibitorischer Effekt auf den oxidativen Burst auftritt. Die
Vermessung des oxidativen Burst erfolgte nach Zugabe von DCF, das bei Bildung von
Sauerstoffradikalen grün fluoresziert, mittels ELISA Readers. Durch 30 Messungen im 5 min
Takt wurde eine Zeitkurve aufgezeichnet.
Die Produktion der reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) der Neutrophilen nahm nach
Stimulation mit PMA als Positivkontrolle oder A. fumigatus in einer Wachstumskurve stetig
zu (Abb. 6.6A). Nach 100 min gelangten die Neutrophilen, die mit PMA stimuliert waren, in
die Plateauphase. Dieses Plateau war nach Zugabe von RAD zu diesem Zeitpunkt noch nicht
erreicht, was bedeutet, dass diese Zellen weniger ROS herstellten. In der jeweiligen
Negativkontrolle mit Medium war kein Unterschied zwischen Kontrolle und RAD-
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