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6 Ergebnisse
A-549 mit moDCs lag bei 9, die RIN der A-549 mit mDCs bei 9,5 (Abb. 6.18). Das lässt auf
eine hohe und auch zwischen den Proben vergleichbare Qualität der RNA schließen.
Abbildung 6.18: Repräsentative Qualitätsanalyse der RNA mittels Bioanalyzer. Links ist das
Histogramm einer exemplarischen RNA dargestellt mit der Anzahl der Nukleotide (nt) auf
der x-Achse und der gemessenen Absorption während der elektrophoretischen Auftrennung.
Der Peak bei ca. 2000 nt stellt die 18S RNA dar, der Peak bei ca. 4000 Nt die 28S RNA.
Rechst ist das dazugehörige Gel dargestellt, auf dem die 18S und 28S RNA als Banden zu
sehen sind.
Nach der Amplifizierung lag die Gesamtmenge der gewonnenen aRNA zwischen 30 bis
40 µg. Für jedes Epoxy-Slide wurden 500 ng Probe und 500 ng Pool (= Gemisch aus allen
aRNAs) in cDNA umgeschrieben und währenddessen mit Cy3 (Probe) oder Cy5 (Pool)
gelabelt. Im Anschluss konnten sie hybridisiert, eingescannt und ausgewertet werden. Es
wurde die Expression von insgesamt 117 Zytokinen, Rezeptoren und weiteren mit einer
Entzündungsreaktion in Verbindung stehenden Genen analysiert Eine genaue Liste der
Sonden (Operon) findet sich im Anhang unter Kapitel 9.2.
Die moDCs zusammen mit A-549-Zellen zeigten nach 3 h 21 mehr als 2-fach regulierte Gene
(Tab. 6.1), was einem Anteil von rund 18 % der 117 ausgewählten Gene entsprach. Auffällig
war, dass die meisten Gene hochreguliert waren. Die zwei Chemokine CCL17 und CCL18,
die beide naive T-Lymphozyten und dendritische Zellen als Zielzellen haben, sowie
DC-SIGN, das ein Adhäsionsmolekül für naive T-Lymphozyten ist, waren die einzigen Gene,
die herunterreguliert waren. Das am stärksten regulierte Gen war CCL20, gefolgt von CCL4,
die unter anderem T-Lymphozyten aktivieren. Des Weiteren wurden noch C-X-C-motif
Zytokine (CXCL1, CXCL2, CXCL3 und CXCL5) mehr als 2-fach nach Konfrontation mit
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