Dokument 1.pdf - OPUS - Universität Würzburg

Inhaltsverzeichnis
5.7.1 Infektion der moDCs zur Analyse der Zytokinproduktion __________________ 47
5.7.2 DNA Isolierung und Reinigung _______________________________________ 47
5.7.3 RNA Isolierung und Reinigung _______________________________________ 47
5.7.4 Reverse Transkription ______________________________________________ 48
5.7.5 Realtime Polymerasekettenreaktion ___________________________________ 49
5.7.5.1 Durchführung im LightCycler ___________________________________ 49
5.7.5.2 Durchführung im StepOnePlus ___________________________________ 51
5.7.5.3 Agarose-Gelelektrophorese ______________________________________ 52
5.7.6 ELISA __________________________________________________________ 52
5.7.6.1 Durchführung nach Biosource ___________________________________ 52
5.7.6.2 Home-made ELISA-Assays _____________________________________ 53
5.8 Konfrontationsuntersuchungen _____________________________________ 54
5.8.1 Analyse der Oberflächenmarker ______________________________________ 54
5.8.2 T-Zell-Proliferations Assay __________________________________________ 54
5.8.3 Oxidativer Burst __________________________________________________ 55
5.8.4 Phagozytose-Assay ________________________________________________ 56
5.8.4.1 Durchführung mit Dextran-Beads _________________________________ 56
5.8.4.2 Durchführung mit Aspergillus fumigatus Konidien ___________________ 56
5.8.5 Plattenbasierter Abtötungsversuch ____________________________________ 56
5.9 Statistik ________________________________________________________ 57
6 Ergebnisse ___________________________________________________ 58
6.1 Kontrolle der Reinheit der isolierten, primären Zellen ___________________ 58
6.2 Einfluss von RAD als Beispiel eines Immunsuppressivums auf das
Pilzwachstum ___________________________________________________ 61
6.3 Einfluss von RAD auf neutrophile Granulozyten _______________________ 62
6.4 Einfluss von RAD auf moDCs ______________________________________ 64
6.4.1 Ausdifferenzierung der moDCs _______________________________________ 64
6.4.2 Expression von den Rezeptoren TLR2, TLR4 und Dectin-1 auf moDCs _______ 66
6.4.3 Ausreifen der moDCs nach Konfrontation mit Aspergillus fumigatus oder LPS _ 68
6.4.4 Ausschüttung von Zytokinen _________________________________________ 69
6.4.5 Phagozytose von Dextran-Beads und Aspergillus fumigatus Konidien ________ 72
6.4.6 Killing von Aspergillus fumigatus _____________________________________ 73
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