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7 Diskussion
7.3 In vitro Untersuchung eines Risikogens für invasive
Aspergillose
Um herauszufinden, ob es eine genetische Prädisposition bei Patienten gibt, an invasiver
Aspergillose zu erkranken, wurden SNPs bei Patienten nach Stammzelltransplantation mit IA
im Vergleich zu Patienten mit gleicher Behandlung aber ausbleibender Infektion untersucht.
Dadurch konnten gewisse Haplotypen identifiziert werden, die ein erhöhtes Risiko aufweisen.
Es wurden drei gekoppelt vererbte SNPs – rs3921 (C/G), rs1554013 (C/T) und rs4257674 (A/
G) – im Genom von CXCL10 entdeckt, bei denen ein Haplotyp (CC CC GG) verstärkt bei IA
auftrat (Mezger et al., 2008-2). Mezger et al. (2008-2) beobachteten zusätzlich deutlich
höhere Expressionsniveaus des CXCL10-Gens im Haplotyp GG TT AA von freiwilligen,
gesunden Spendern im Vergleich zu Spendern mit der Allelkombination CC CC GG.
CXCL10 ist ein Chemokin, das TH1-Zellen zur Migration anregt. Die Wichtigkeit einer TH-1-
Antwort zum Schutz gegen IA wurde sowohl im Mausmodell (Cenci et al., 1997; Cenci et al.,
1998; Cenci et al., 1999) als auch im Menschen hinreichend untersucht (Hebart et al., 2002;
Chaudhary et al., 2010).
7.3.1 Suppression der Expression des CXCL10-Gens mittels siRNA
Um zu überprüfen, ob die Expression des CXCL10-Gens einen Einfluss auf die Reifung und
Zytokinproduktion dendritischer Zellen nach Konfrontation mit A. fumigatus hat, wurde das
Gen mittels small interfering RNA (siRNA) ausgeschaltet. Im Fall der moDCs wurde als
Methode die Elektroporation zur Transfektion der siRNA angewandt, wie von Prechtel et al.
(2006) vorgeschlagen und von Mezger (2007) optimiert. Vor allem für siRNA-Anwendungen
bei Patienten eignet sich die Elektroporation, da man durch chemische Substanzen oft
unerwünschte Nebeneffekte, wie zum Beispiel Allergien, verursacht.
Obwohl die siRNA spezifisch ist, kann es dennoch zu unspezifischen Effekten kommen.
Durch die Transfektion mit siRNA können unerwünschte Immunreaktionswege ausgelöst
werden (Hannon, Rossi, 2004). Deshalb wurden moDCs zur Kontrolle mit einer non silencing
siRNA transfiziert, welche, wie gewünscht, keine Effekte auf die getesteten Gene zeigte. Die
siRNA CXCL10 (2) zeigte keine signifikante Reduktion der Genexpression, weshalb mit
CXCL10 (1), die weitaus wirksamer war, da sie auf mRNA-Ebene nur noch eine geringe
Restexpression von CXCL10 hervorrief, weitergearbeitet wurde. Im Mediumüberstand zeigte
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