TESIS COMPLETA.pdf - El Instituto Español de Oceanografía

Análisis y cuantificación de LAS y SPC
El gradiente de elución utilizado está basado en métodos descritos anteriormente
(Cavalli et al 1996; González-Mazo et al., 1997), pero presenta importantes
modificaciones (emplea metanol en lugar de acetonitrilo, disminuye la concentración de
hidrogenosulfato de tetraetilamonio y cambia las proporciones de los eluyentes).
En los casos en los que ha sido necesario validar la asignación de los picos
obtenida con el procedimiento anterior se ha aplicado la cromatografía líquida con
espectrometría de masas (MS). Esta técnica ha sido especialmente útil para la
determinación inequívoca del C 7 SPC del que no se disponía de un patrón, y corroborar la
asignación del resto de los intermedios de degradación, especialmente en muestras
reales y en los ensayos de biodegradación. Estos análisis se han realizado utilizando el
equipo HPLC/MS del Servicio Central de Ciencia y Tecnología de la Universidad de
Cádiz, y las condiciones aplicadas son las propuestas por González-Mazo et al., (1997).
Este método consiste en un régimen de separación en gradiente con una disolución de
agua (A) y AcN/H 2 O (80/20) (B), ambas con 5mM de trietilamina y 5mM de ácido acético,
y una columna C 18 Hypersil 250×2mm (5µm de tamaño de partícula) como fase
estacionaria. Se ha aplicado un flujo de 0.1 mL·min -1 , y un gradiente prácticamente lineal
desde 5%A+95%B a 100%A en 40 minutos, manteniendo esta proporción hasta los 65
minutos del análisis.
2.3.2. Pretratamiento de las muestras sólidas
La técnica de extracción Soxhlet que presenta elevadas recuperaciones para el
LAS (González-Mazo et al., 1998) ha sido utilizada para la extracción simultánea de LAS
y SPC de muestras sólidas. Las recuperaciones se determinaron dopando sedimentos
marinos con homólogos de LAS (C 10 -C 14 ) y SPC (C 4 , C 8 y C 11 ). Se realizaron tres
experimentos a distintas concentraciones: A) 50 µg·Kg -1 SPC + 50 µg·Kg -1 LAS; B) 200
µg·Kg -1 SPC + 5 µg·g -1 LAS y C) 500 µg·kg -1 SPC + 25 µg·g -1 LAS. Las diferencias entre
las concentraciones de LAS y SPC obedecen a la menor concentración de SPC que
usualmente se detecta en sedimento. En los tres casos la mezcla se homogeneizó y se
dejó secar en la estufa a 50ºC durante 72 horas. Kreisselmeier y Durbeck (1997) han
demostrado que transcurrido este tiempo se favorece la interacción del compuesto con el
sedimento, simulando las condiciones reales en las que estos compuestos se incorporan
al mismo.
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