TESIS COMPLETA.pdf - El Instituto EspaÃ±ol de OceanografÃa

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Capítulo 2 Alrededor de unos 10 gramos de sedimento seco se colocaron en cartuchos de extracción Soxhlet, previamente lavados con metanol(3h). La extracción se realizó con 60 mL de metanol durante 12 horas. Los extractos metanólicos se llevaron a sequedad con un rotavapor y el residuo se redisolvió en 200 mL de agua tibia (50-55ºC) con la ayuda de un baño de ultrasonidos. Los extractos acuosos finales se sometieron al tratamiento de extracción en fase sólida, que se describe en el siguiente apartado de la memoria. Este ensayo se realizó por triplicado. 2.3.3. Extracción en fase sólida Como ha sido señalado el método extracción en fase sólida propuesto por González-Mazo y Gómez-Parra (1996) presenta buenas recuperaciones para el LAS, pero no para los SPC de cadena corta. Con el objetivo de detectar en que etapa del tratamiento se pierden los SPC, se optó por analizar todas las fracciones obtenidas (A, B, C, F) según se muestra en el esquema del procedimiento de la figura 2.1. Las fracciones “A” y “B” se neutralizaron con NaOH y se pasaron a continuación por una minicolumna de intercambio aniónico (SAX). El resto fueron analizadas directamente por HPLC. Diferentes variables que afectan la eficiencia de la extracción, tales como el tipo de minicolumna (C 18 , Bond Elut C 18 , Lichrolut EN y SAX), pH, lavado, fuerza iónica y eluyentes utilizados, han sido estudiadas y optimizadas. La recuperación se ha calculado tratando distintas disoluciones de LAS y SPC en agua de mar, a concentraciones representativas desde el punto de vista ambiental (10, 50, 100, 200 y 450 µg/L de cada homólogo). El límite de detección y el volumen de ruptura del procedimiento también se han determinado. Para el cálculo de este último se prepararon disoluciones de agua oceánica (100, 250 y 500 mL) con la misma masa (5 µg) de cada uno de los homólogos disponibles. El proceso de extracción en fase sólida se ha desarrollado en una unidad Adsorbex SPU de 24 canales y todos los ensayos se realizaron por triplicado. 28
Análisis y cuantificación de LAS y SPC MeOH/H 2 O (30/70) 6 mL Muestra ( pH = 3) MeOH, 10 mL C18 Fr. A MeOH (AcH 2%), 5 mL MeOH, 5mL Fr. B MeOH (2N HCl), 3 mL ++ Fr.C Fr. F Flujo entrante Flujo saliente Figura 2.1. Esquema del tratamiento de extracción en fase sólida propuesto para el LAS en muestras de origen marino por González-Mazo y Gómez- Parra (1996), indicando las fracciones (Fr.) tomadas para su evaluación (A,B,C y F). 29
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