TESIS COMPLETA.pdf - El Instituto Español de Oceanografía

Biodegradación del LAS
En general las muestras se tomaron reduciendo la frecuencia de muestreo
conforme transcurría el ensayo. Las muestras de agua (50mL en reactores de 3L) se
fijaron con formaldehído (4%), y se mantuvieron a 4ºC hasta que fueron analizadas.
Todas las muestras se trataron siguiendo el procedimiento propuesto en la presente
memoria para la determinación de LAS y SPC descrito en el capítulo 2. La cuantificación
de las muestras se realizó utilizando patrones externos en agua de mar.
3.2.5. Recuento de microorganismos
La población total de bacterias heterótrofas se ha estimado para cada caso y por
duplicado a lo largo de todo el ensayo. Se tomaron muestras representativas del medio
(1mL), se cultivaron porciones diluidas (10µL de cada una de ellas) en Marine Agar 2216
(Difco) durante 48h a 35ºC (Del Valls et al., 1996). El número de bacterias se determinó
por el método de recuento del número total de células viables (Buck, 1979). Todos los
recuentos se realizaron por duplicado.
En algunos casos se procedió al aislamiento e identificación de los
microorganismos presentes en los ensayos, mediante el análisis de los ácidos grasos
metil éster (FAME) totales de la célula, utilizando el sistema MIDI, según los protocolos
de cultivo en medio sólido y las especificaciones instrumentales recomendadas por el
fabricante (Microbial Identification System, Inc., Delaware, EEUU). La base de datos
empleada fue la Sherlock Standard Aerobe Database. La identificación se realizó en el
Instituto de Recursos Naturales y Agrobiología de Sevilla (CSIC).
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