Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
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Abb. 43: Position 3 und 6 des PS-CPL-Assays mit der Transfektante JM22 (IL-2-ELISA)
Die beiden Diagramme zeigen beispielhaft zwei Positionen (Position 3 und 6) des PS-CPL-Experiments mit
HLA-A*02-positiven LTK-Zellen als APZ und den mit dem TZR JM22 transfizierten Maus-Hybridomzellen.
Die APZ wurden am Tag zuvor ausgebracht und am nächsten Tag 6h mit den Peptidmixen inkubiert. Über
Nacht wurde die Transfektante JM22 zugegeben und am folgenden Tag der IL-2-Gehalt im Überstand mittels
IL-2-ELISA gemessen. Die x-Achse zeigt die 20 verschiedenen AS, die y-Achse zeigt die optische Dichte bei
einer Wellenlänge von 450nm. Die mit einem Stern markierte AS entspricht der im flu-Peptid 58-66 an dieser
Position vorliegenden AS.
Abb. 43 zeigt die Auswertung des IL-2-ELISAs der beiden PS-CPL-Versuche mit der JM22-
Transfektante. Es sind nicht alle Positionen dargestellt, sondern lediglich zwei
charakteristische Positionen herausgegriffen (Position 3 und 6). Die x-Achse zeigt die AS, die
an der entsprechenden Position definiert ist, die y-Achse die optische Dichte gemessen bei
einer Wellenlänge von 450nm. Die mit einem Stern markierte AS entspricht der im flu-Peptid
58-66 an dieser Position vorliegenden AS.
Die Auswertung der verschiedenen Library-Positionen zeigt in den meisten Positionen kein
Signal (vgl. Position 6). Andere Positionen weisen zwar in einigen Aminosäuren ein erhöhtes
Signal auf, welches sich jedoch in der Wiederholung des Experiments nicht reproduzieren lässt
(vgl. Position 3).
8.2 PS-CPL-Versuch mit den TZR 435 transfizierten Maus-
Hybridomzellen
Der Klon 435 (Vβ1-Vα2.2) ist von besonderem Interesse, da er im Patienten PM16488
expandiert ist. Deshalb führten wir die PS-CPL-Experimente zunächst mit diesem Klon durch.
Da die HLA-Restriktion im Gegensatz zum flu-Peptid 58-66 nicht bekannt war, verwendeten
wir für die Library-Experimente autologe EBV-B-Zellen des Patienten PM16488. Diese Zellen
exprimieren wie zuvor bereits erwähnt alle patientenspezifischen HLA-Moleküle auf ihrer
Oberfläche.
Der PS-CPL-Versuch wurde wie in II.4.9 beschrieben durchgeführt.
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