Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

Inhaltsverzeichnis
1.6.1.2 Primer für die Prä-Amplifikation 19
1.6.1.3 Klonspezifische Primer für die TZR-β-Ketten 20
1.6.1.4 Universelle Primer Sets für die TZR-α-Ketten 21
1.6.1.5 Klonspezifische Primer für die TZR-α-Ketten 22
1.6.2 Primer für die TZR-Klonierung 22
1.6.2.1 Klonierung der TZR des Patienten PM16488 22
1.6.2.2 Klonierung des TZR JM22 23
1.6.2.3 Primer für die Amplifikation der patientenspezifischen HLA-Moleküle 23
1.7 Antikörper 24
1.7.1 Primäre und direkt gekoppelte Antikörper 24
1.7.2 Sekundäre Antikörper 24
1.8 Eukaryotische Zellen 25
1.9 Allgemeine Puffer und Lösungen 25
1.10 Zellkultur-Reagenzien 26
1.11 Kits und spezielle Reagenzien 26
2. Molekularbiologische Methoden 27
2.1 Anzucht von Bakterienkulturen 27
2.1.1 Bakterienwachstum auf Agarplatten 27
2.1.2 Vermehrung von Bakterien über Flüssigkulturen 27
2.1.3 Konservierung von Bakterienstämmen 28
2.2 Transformation von Bakterien mittels Elektroporation 28
2.2.1 Herstellung kompetenter Bakterien für die Elektroporation 28
2.2.2 Elektroporation 29
2.3 Isolierung und Reinigung von Plasmid-DNA aus Bakterienzellen 29
2.3.1 Isolierung von Plasmid-DNA im präparativen Maßstab 29
2.3.2 Isolierung von Plasmid-DNA für analytische Zwecke 30
2.3.3 DNA-Konzentrationsbestimmung 31
2.4 Präzipitation von Plasmid-DNA und PCR-Produkten 31
2.4.1 Präzipitation durch Pellet Paint 31
2.4.2 Präzipitation durch Natriumacetat / Ethanol 31
2.5 Gesamt-RNA-Isolierung und cDNA-Herstellung aus eukaryotischen
Zellen
2.5.1 Isolierung von Gesamt-RNA aus eukaryotischen Zellen 32
2.5.2 Erststrang cDNA-Synthese durch reverseTranskription von mRNA 32
II
32