Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

Inhaltsverzeichnis
2.6 Gelelektrophoretische Analyse von DNA 33
2.6.1 Analyse von DNA in Agarosegelen 33
2.6.2 DNA-Größenstandards 34
2.6.3 Isolierung von DNA-Fragmenten aus Agarosegelen 34
2.6.4 Reinigung von DNA-Fragmenten 34
2.7 Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) 35
2.7.1 Amplifizierung von DNA-Sequenzen über PCR 35
2.7.2 In-vitro-Mutagenese über PCR 36
2.7.3 Einzelzell-RT-PCR 36
2.8 Klonierung 38
2.8.1 Schneiden der DNA mit Restriktionsendodukleasen 38
2.8.2 Ligation von DNA-Molekülen 39
2.9 Sequenzierung 40
2.10 CDR3-Spectratyping 41
3. Isolation von Einzelzellen aus Gefrierschnitten 43
3.1 Anfertigen von Gefrierschnitten 43
3.2 Aufbringen von Zellen auf Objektträger mittels Cytospin 43
3.3 Immunhistologie 44
3.3.1 Alkalische Phosphatase Färbung (AP-Färbung) 44
3.3.2 Immunfluoreszenz-Färbung 44
3.4 Lasermikrodissektion 46
4. Zellbiologische Methoden 46
4.1 Kultivierung von Suspensionszellen 46
4.2 Kultivierung von adhärent wachsenden Zellen 47
4.3 Bestimmung der Zellzahl 47
4.4 Einfrieren und Auftauen von Zellen 47
4.5 Transfektion von Zellen 48
4.5.1 Transfektion von Zellen durch Elektroporation 48
4.5.2 Transfektion von Zellen mit Lipofectamin 49
4.5.3 Selektion der transfizierten Zellen 49
4.6 Transduktion von Zellen mit Hilfe von Retroviren 50
4.7 FACS-Analyse 50
4.8 Aktivierung der Transfektanten 51
4.8.1 Physiologische Aktivierung der Transfektanten 51
III