Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

I. Einleitung
Medikation des Patienten sein. Die bisher schubförmig verlaufende MS-Erkrankung wandelte
sich in eine sekundär progressive Form. Um die vermutete α-Kette dennoch zu bestätigen,
wurde erneut die Hirnbiopsie zur Analyse herangezogen. Die Ergebnisse der durchgeführten
CDR3-Spektratypings sowie die Analyse der Vβ1 + Einzelzellen aus dem Blut und dem Hirn
sind im Ergebnisteil näher dargestellt.
Der folgende Abschnitt erläutert kurz die Fragestellung dieser Arbeit sowie die prinzipielle
Vorgehensweise.
7. Fragestellung
Bei Patienten mit Myositis bzw. Multipler Sklerose wandern T-Lymphozyten in den Muskel
bzw. das Gehirn ein. Weshalb diese Zellen des Immunsystems dort einwandern und welches
Antigen sie erkennen, ist bislang noch nicht geklärt. Ein Schritt zur Beantwortung dieser Frage
ist die Analyse des TZR einzelner, ins Zielgewebe infiltrierter potentiell autoaggressiver T-
Zellen. Diese sollten aus Muskel- bzw. Hirngewebe der Patienten mittels Lasermikrodissektion
gewonnen und mittels Einzelzell-RT-PCR analysiert werden. Nach der Identifizierung der
TZR sollten diese durch funktionelle Expression in einer murinen Hybridomzelllinie wieder
„zum Leben erweckt“ und für erste Versuche zur AG-Suche eingesetzt werden. Durch die
Identifizierung eines Antigens könnte man möglicherweise Rückschlüsse auf die
Krankheitsursache ziehen und effektivere Therapieansätze ermöglichen.
7.1 Analyse potentiell autoaggressiver T-Lymphozyten
Um beide TZR-Ketten aus der gleichen T-Zelle zu amplifizieren, muss eine sehr sensitive
Einzelzell-RT-PCR-Methode angewandt werden, die im Rahmen dieser Arbeit entwickelt
wurde. Nur wenn man sicherstellen kann, dass die erhaltene α- und β-Sequenz von derselben
T-Zelle stammen, kann man einen funktionellen TZR generieren und diesen für die
Antigensuche einsetzen.
Es gibt einige Methoden aus Gesamt-cDNA durch speziell ausgewählte Oligonukleotide die
variablen und hypervariablen Bereiche der TZR-α- und β-Ketten zu amplifizieren
(zusammengefasst in Dornmair et al: 2003 Frohmann et al., 1988; Uematsu et al., 1991; Choi
et al., 1989). Anhand dieser Analysemethoden bekommt man jedoch lediglich einen Überblick
über das T-Zell-Repertoire. Man kann jedoch nicht eindeutig auf die exakte αβ-TZR-Paarung
schließen, da die Analyse mit dem gesamten Material gleichzeitig durchgeführt wird.
Nachfolgendes Schema verdeutlicht diese Problematik.
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