Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
Ein Grund für das negative Ergebnis der Untersuchung beider T-Zell-Rezeptoren könnte die zu
geringe Sensitivität der verwendeten Analysemethode sein. Die Sensitivität des IL-2-ELISAs
liegt bei etwa 2pg IL-2, was nur gering über dem erwarteten Signal der TZR-Transfektante
liegt. Das schlechte Signal-Rausch-Verhältnis erschwert eine eindeutige Auswertung, da
schwache Signale nicht von Hintergrundsignalen unterschieden werden können.
Weitere Gründe für das negative Ergebnis könnten auch die fehlende Affinität zwischen TZR
und MHC/Peptid-Komplex sowie die zu geringe Degeneration des TZR sein. Degeneration
bedeutet, dass ein bestimmter TZR nicht nur durch ein bestimmtes Peptid, sondern durch viele
verschiedene Peptide aktiviert werden kann (zusammengefasst in Wilson et al., 2004). Ist die
Degeneration zu gering, enthält der jeweilige Peptidmix der PS-CPL zu wenige Peptide, die in
der Lage sind, die TZR-Transfektante zu aktivieren und somit ein ausreichend hohes IL-2-
Signal zu erreichen.
Einige Beispiele aus der Literatur zeigen, dass PS-CPL-Versuche oftmals nicht das native
Peptid, sondern ein anderes stärker aktivierendes Peptid detektieren (Hernández et al., 2004;
Zhao et al., 2001).
Nachfolgende Abbildung 45 zeigt eine Zusammenfassung der PS-CPL-Versuche von
Hernández et al. mit einem bekannten Peptid p572 der menschlichen Telomerase Reversen
Transkriptase. In vier aufeinander folgenden Versuchen konnte die native AS nur in drei von
neun Positionen detektiert werden (Position 3 = F, Phenylalanin; Position 6 = R, Arginin;
Position 9 = V, Valin). Außerdem sieht man, dass die korrekte AS nicht in allen vier der vier
durchgeführten Experimente erschein, sondern bei zwei AS lediglich in zwei bzw. drei
Versuchen auftrat.
P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9
4x Y H M R R Y
3x L RT DP KM G P Y R VP
2x T S FY Y AT SH SM K EF
No peptides 3 4 5 3 3 4 4 3 4
Native seq. R L F F Y R K S V
Abb. 45:
Häufigkeit
der aktivsten
Library-Mixe
(aus
Hernández et
al., 2004)
Aus diesem Grund verwendet man die Methode der PS-CPL oftmals nicht nur dazu, das native
Peptid eines TZR zu finden, sondern Peptid-Analoga von TZR-Klonen zu identifizieren, deren
Antigen bereits bekannt ist. Die detektierten Peptide können dann zur Vaccinierung gegen
Infektionen oder auch zur Tumorbehandlung eingesetzt werden (zusammengefasst in
Wiesmüller et al., 2001).
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