Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
Vα 2.2 CAMSQGAQ- -KLVF Jα54
Vα 11.1 CAVGSNA-- -RLMF Jα31
Vα 20.1 CLLSSNTG- -KLIF Jα37
Vα 23.1 CAVDSGTY- -KYIF Jα40
Abb. 28: Vergleich der Aminosäuresequenz der CDR3-Region der vier detektierten TZR-α-
Ketten
Dargestellt ist die Aminosäuresequenz der CDR3-Region der vier detektierten TZR-α-Ketten. Alle zeigen
eher kleine und hydrophile Aminosäuren mit Ausnahme der negativ geladenen Asparaginsäure in der Vα23-
Jα40-Kette.
Orange: konsensus Region; Grün: CDR3-Region; Grau: N-Region
3.3 Analyse der Vβ23 + Einzelzellen des Patienten IBM15551
Die 250 Vβ23 + -Zellen des Patienten IBM15551 wurden ebenfalls mit dem gleichen Verfahren
der Einzelzell-RT-PCR analysiert.
In acht der 250 Zellen konnten wir die aus dem CDR3-Spektratyping bekannte expandierte
TZR-β-Kette Vβ23-Jβ1.1 detektieren (3,2%). Zwei der acht Zellen wiesen eine gepaarte TZR-
α-Kette auf (0,8%), eine Vα4.2-Jα47 (Zelle 149) sowie eine Vα23.1-Jα39 (Zelle 231). Die
nochmalige Analyse der acht Vβ23 + -Zellen mit klonspezifischen Primern für Vα4.2 sowie
Vα23 ergaben keine neuen αβ-Paarungen.
Abb. 29: PCR-Produkte analysierter Vβ23-Jβ1.1-positiver Einzelzellen des Patienten IBM15551
und die dazugehörige Nukleotidsequenz
Die isolierten Zellen wurden mit klonspezifischen Primern gegen die expandierte Vβ23-Jβ1.1-TZR-Kette
analysiert. Dargestellt ist die Analyse von zwei Zellen, die sowohl für die β-Kette als auch später für die α-
Kette ein positives Ergebnis zeigten. Die entsprechende Bande ist jeweils mit einem Pfeil markiert.
A: Spur M: 100bp-DNA-Marker
Spur 149: mit Einzelzell-PCR analysierte Vβ23-Jβ1.1-positive Einzelzelle Nummer 149
B: Spur M: 100bp-DNA-Marker
Spur 231: mit Einzelzell-PCR analysierte Vβ23-Jβ1.1-positive Einzelzelle Nummer 231
Die Nukleotidsequenz zeigt einen Ausschnitt der expandierten TZR-β-Kette Vβ23-Jβ1.1 des Patienten
IBM15551, erhalten aus analysierten Einzelzellen.
Abb. 29 zeigt die PCR-Produkte der β-Ketten-Analyse der Zellen 149 und 231 sowie deren
Nukleotidsequenz. Beide Zellen lieferten die korrekte expandierte Vβ23-Jβ1.1-Sequenz sowie
eine gepaarte TZR-α-Kette, gezeigt in Abb. 30. In Zelle 149 wurde eine Vα4.2-Jα47 in Zelle
231 eine Vα23-Jα39 identifiziert.
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