Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
möglich ist, beschrieb Kessels et al. 2001. Jedoch tritt auch hier die Möglichkeit einer TZR-
Hybrid-Expression mit unbekannter Spezifität auf. Desweiteren wachsen T-Zellen langsam
und können schlecht transfiziert werden. Der Vorteil solcher Zellen ist der
Aktivierungsnachweis über Cytotoxizitätsmessung, der Aktivierungsnachweis der Maus-
Hybridomzellen ist nur über die weniger sensitive Interleukin-2-Messung möglich.
Antigensuche
Nach der Identifizierung der TZR-Pärchen aus den verschiedenen Patienten und der
Expression der vier TZR des Patienten PM16488 in der Hybridomzelllinie 58α - β - führten wir
erste Versuche zur Detektion eines möglichen Antigens durch.
Um zu untersuchen, ob das gesuchte Peptid möglicherweise ein muskelspezifisches Peptid ist,
wurden die TZR-Transfektanten mit der menschlichen Rhabdomyosarkom-Tumor Zelllinie
TE671 cokultiviert. Ein Nachteil dieser Zelllinie ist, dass sie keine patientenspezifischen HLA-
Moleküle auf der Zelloberfläche exprimiert. Wir mussten daher alle HLA-Moleküle des
Patienten PM16488 zunächst einzeln in die Zelllinie transfizieren. Die TZR-Transfektanten
konnten jedoch durch die präsentierten Peptide der Muskelzelllinie nicht aktiviert werden.
Durch die Zugabe von Interferon γ sollten die an der Oberfläche präsentierten Peptide variiert
werden. Das Cytokin Interferon γ beeinflusst die Expression Interferon γ-induzierbarer
Immunoproteasomuntereinheiten wie z.B. LMP2 und LMP7 sowie des PA28-Aktivators des
20S Proteasoms (Boes et al., 1994; Gaczynska et al., 1994; Ahn et al.; 1995), nötig für die
Ausbildung von Immunoproteasomen. Die durch das Immunoproteasom gebildeten Peptide
weisen vorzugsweise hydrophobe oder basische carboxyterminale Enden auf (Toes et al.,
2001). Die Transfektanten zeigten jedoch auch nach Interferon γ-Inkubation keine Aktivierung.
Anschließend untersuchten wir, ob einer der TZR ein ubiquitär exprimiertes Antigen erkennt
und durch dieses aktiviert werden kann. Hierfür verwendeten wir autologe EBV-B-Zellen als
APZ, d.h. B-Zellen des Patienten PM16488, welche mit EBV immortalisiert wurden. Diese
haben den Vorteil, dass sie alle patientenspezifischen HLA-Moleküle in der richtigen
Gewichtung auf ihrer Zelloberfläche exprimieren und die exprimierten Proteine alle eventuell
vorhandenen patientenspezifischen Mutationen aufweisen. Die Cokultivierung der EBV-B-
Zellen mit den vier TZR-Transfektanten zeigte jedoch sowohl mit als auch ohne Interferon-γ
keine messbare Aktivierung. Wir können jedoch nicht völlig ausschließen, dass das gesuchte
Peptid ein ubiquitär exprimiertes Autoantigen oder ein muskelspezifisches Antigen ist. Da alle
Gene in der Zelle unter der Kontrolle verschieden starker Promotoren stehen, werden Gene
unterschiedlich stark exprimiert. Stünde das hier gesuchte Antigen unter der Kontrolle eines
schwachen Promotors, wäre die Expression zu schwach, um eine ausreichende Menge Peptid
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