Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
In 60 der 90 analysierten Zellen konnten wir sowohl die COP-β-Kette als auch beide TZR-α-
Ketten detektieren. Dies beweißt, dass eine eventuell vorhandene zweite α-Kette mit großer
Wahrscheinlichkeit detektiert werden würde. Die PCR-Produkte wurden wiederum mittels
Restriktionsverdau mit HindIII (siehe Abb. 21) für die β-Kette und MspI für die beiden α-
Ketten überprüft (Abb. 23).
Abb. 23: Überprüfung der Vα2.3- sowie der Vα23-PCR-Produkte der analysierten COP-1 bzw.
BBC9-Einzelzellen durch einen MspI-Restriktionsverdau
Die PCR-Produkte aus der α-PCR wurden durch einen Restriktionsverdau mit MspI auf ihre Richtigkeit
überprüft. Die korrekt verdaute COP-α-Kette zeigt eine Doppelbande bei etwa 100 bp. Die korrekt verdaute
BBC-α-Kette zeigt eine Bande bei 68bp bzw. 154bp.
Spur M: 100bp-DNA-Marker
Spur 1-18: mit MspI verdaute Vα2.3-sowie Vα23-PCR-Produkte der analysierten COP-1- bzw. BBC9-
Einzelzellen
Spur 19: unverdaute Kontrolle
Durch MspI-Restriktionsverdau konnten wir gleichzeitig sowohl die COP-1 als auch die
BBC9-TZR-α-Kette testen. Verdaute COP-Sequenzen ergaben eine Doppelbande bei ca.
100bp, die verdaute BBC-Sequenz zeigte eine Bande bei 68bp bzw. 154bp. Das Gelbild zeigt,
dass in den meisten Proben sowohl ein PCR-Produkt der COP-α-Kette als auch der BBC-α-
Kette vorhanden war. In einigen trat entweder die COP- oder die BBC-TZR-α-Kette auf .
3.2 Analyse der Vβ1 + Einzelzellen des Patienten PM16488
Nachdem wir die Effizienz der Einzelzell-RT-PCR-Methode an einem Modell-System
bestimmt hatten, wurden anschließend alle vom Patienten PM16488 isolierten Vβ1 + -T-
Lymphozyten analysiert. Nach der RT-Reaktion sowie der αβ-Prä-Amplifikation wurden die
Zellen zunächst mit klonspezifischen Primern (Vβ-1-for-out - 16488β-rev-out sowie Vβ-1-for-
in - 16488β-rev-in) auf die TZR-β-Kette untersucht. Nur die positiven Zellen wurden mit den
universellen Primer Sets a-e auf eine korrespondierende TZR-α-Kette analysiert (Vα-X1-24 -
for-out - Cα-rev-out sowie Vα-set a-e - Cα-rev-in; siehe Material und Methoden II.1.6.1).
In 64 der 1230 Vβ1 + -Zellen konnten wir die korrekte TZR-β-Kette detektieren (5,2%).
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